目的:嗜酸性粒细胞（Eosinophils,Eos）是免疫反应和过敏反应过程中极为重要的细胞,具有杀伤细菌、抗寄生虫的作用。在损伤部位,嗜酸性粒细胞可以释放其颗粒中的内容物,引起组织损伤,促进炎症进展,其分泌的多种炎性介质诱发粘液分泌、气道收缩等哮喘症状。过去,嗜酸性粒细胞一直被认为是终末期效应细胞,对过敏性哮喘疾病表现出重要影响。后续研究发现,嗜酸性粒细胞也能够发挥多种调控作用,并且嗜酸性粒细胞表达抗原提呈相关分子MHC-II、CD40、CD80等,表明嗜酸性粒细胞很有可能作为抗原提呈细胞发挥作用。最近有研究表明,在房尘螨诱导的过敏性哮喘小鼠中肺嗜酸性粒细胞分为两个亚群。本课题拟研究肺嗜酸性粒细胞亚群不同的抗原提呈能力,实验使用鸡卵清白蛋白（Ovalbumin,OVA）和木瓜蛋白酶（Papain）滴鼻免疫小鼠,诱导小鼠过敏性哮喘模型,研究过敏性哮喘模型小鼠中肺嗜酸性粒细胞亚群是否具有吞噬提呈抗原并且诱导T细胞活化增殖的能力。研究方法:1.在第0、2天用OVA/Papain滴鼻致敏C57BL/6雌性小鼠,然后在第10天再免疫一次小鼠,进一步加强炎症反应,最后在第17、18、19天连续用OVA滴鼻免疫三天,诱导小鼠过敏性哮喘模型,在第21天处死小鼠,制取肺脏单细胞悬液,染色并用流式细胞仪分析小鼠肺嗜酸性粒细胞的表型特征。2.如1所述,用OVA/Papain滴鼻免疫小鼠,诱导小鼠过敏性哮喘模型,然后在不同时间点（第0、1、3、10、17、21天）检测,流式细胞仪分析小鼠肺脏、支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）以及血液中嗜酸性粒细胞亚群的数量及百分比动态变化。3.如1所述,用OVA/Papain滴鼻免疫小鼠,诱导小鼠过敏性哮喘模型,在不同时间点（第0、1、3、10、17、21天）检测,制备肺单细胞悬液,染色并用流式细胞仪分析小鼠肺中嗜酸性粒细胞亚群MHC-II、CD80、CD86的表达。4.使用荧光标记抗原OVA-FITC滴鼻免疫稳态小鼠（D0）和过敏性哮喘小鼠（D21）,在12小时后处死小鼠,流式细胞仪分析小鼠肺脏、支气管肺泡灌洗液中rEos细胞亚群和iEos细胞亚群在体内吞噬抗原的能力。分选稳态小鼠（D0）和过敏性哮喘模型小鼠（D21）的肺嗜酸性粒细胞亚群,分别加入10μg OVA-FITC进行体外共培养,6小时后流式细胞仪检测rEos细胞亚群和iEos细胞亚群在体外吞噬抗原的能力。5.分选过敏性哮喘小鼠肺rEos、iEos、DCs,分选初始OT-II T（Na?ve OT-II）细胞,将rEos、iEos、DCs分别与Cell Proliferation Dye（e450）标记的Na?ve OT-II T细胞体外共培养,四天后流式细胞仪检测T细胞的活化增殖情况。结果:1.在未免疫过的Na?ve C57BL/6小鼠肺中只存在rEos细胞亚群,其表型为SSC^hii Siglec-F^miCD125^miCD101^-CD62L^hi;而在使用OVA/Papain诱导的过敏性哮喘模型小鼠中除了rEos细胞亚群外还出现了iEos细胞亚群,其表型SSC^hiSiglec-F^hii CD125^hii CD101⁺CD62L^lo。2.在静息状态,小鼠肺中主要存在rEos细胞亚群,而iEos细胞亚群数量极少,几乎检测不到;但是随着免疫次数的不断增加,小鼠肺中iEos细胞亚群数量及百分比均显著升高;支气管肺泡灌洗液中只存在iEos细胞亚群,并随着炎症的发展数量急剧上升;血液中只有rEos细胞亚群,但是没有发现iEos细胞亚群。3.小鼠过敏性哮喘模型中,哮喘早期rEos细胞亚群和iEos细胞亚群均弱表达MHC-II,但是在哮喘后期iEos细胞亚群MHC-II表达量明显高于rEos细胞亚群。iEos细胞亚群CD80表达水平显著高于rEos细胞亚群,但是嗜酸性粒细胞两亚群CD86表达水平均非常低。4.小鼠过敏性哮喘模型中肺组织中iEos细胞亚群能够获得抗原,但是rEos细胞亚群不能获得抗原;而在支气管肺泡灌洗液中只存在iEos细胞亚群,并且能够获得抗原。体外rEos细胞亚群和iEos细胞亚群均可吞噬抗原,且二者吞噬抗原能力无显著差异。5.体外共培养四天后,rEos细胞亚群和iEos细胞亚群均能够活化Na?ve T细胞增殖,iEos细胞亚群能力较强。结论:在使用OVA/Papain诱导的小鼠过敏性哮喘模型中,肺嗜酸性粒细胞分为两个亚群,rEos表型为SSC^hiSiglec-F^miCD125^miCD101^-CD62L^hi;iEos可浸润到肺泡腔,其表型SSC^hiSiglec-F^hiCD125^hiCD101⁺CD62L^lo。体外rEos和iEos均能够吞噬抗原,但在体内仅iEos能够获得抗原。体外rEos和iEos均能够活化初始T细胞增殖,但iEos能力较强。