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极长链脂酰辅酶A脱氢酶(VLCAD)是脂肪酸β氧化第一步反应的催化酶。建鲤VLCAD基因有两种型,分别是jlVLCAD-a和jlVLCAD-b,它们共同含有20个外显子和19个内含子。利用RT-PCR、RACE方法,获得了 jlVLCAD-a型的完整cDNA序列,共2543bp,包括293bp的5’非翻译区、1980bp阅读框以及270bp的3’非翻译区,阅读框共编码659个氨基酸。通过已知序列设计引物,扩增完整DNA片段,其中jlVLCAD-a,除了内含子8和13外全部获得,而jlVLC4D-b中外显子部分缺少5’和3’端部分序列,内含子部分则全部克隆获得。分析jlVLCAD-a氨基酸序列结构,发现它含有N端结构域,中间结构域,C端结构域,而功能位点有FAD结合位点,底物结合口袋,催化位点,且都存在与结构域中,高度保守。同源性分析表明,jlVLCAD-a氛基酸序列与其它如斑马鱼、罗非鱼、孔雀鱼等相似性高达80.0%以上,与其它脊椎哺乳动物相似性也超过70.0%。而在系统进化树分析中发现,建鲤VLCAD-a属于鱼类分支,且与斑马鱼亲缘关系最近。通过设计jlVLCAD两种基因型的公共引物,采用实时荧光定量法分析jlVLCAD在各个组织的表达状况,发现jlVLCAD基因在肝脏、肌肉、心脏、前肠、脑、肾脏、脾脏、鳃这8个组织中均有表达,其中jlVLCAD在心脏表达量为最高,肌肉和脑次之,肝脏、前肠、肾脏、鳃中表达量相对较少,脾脏中的表达量最低。各个组织中都存在β氧化反应,表达量的差异性,说明组织对脂肪酸氧化供能需求不一样,其中心脏和肌肉需求量最高。VLCAD是脂肪酸β氧化的限速酶,在催化底物方面有一定的选择性,本实验在建鲤日粮中分别添加富含C22:6n-3的鱼油和富含C18:3n-3的亚麻油,检测不同碳链长的脂肪酸对肌肉和肝脏jlVLCAD表达量的影响。结果在肌肉和肝脏中,jlVLCAD的表达量差异不显著(P>0.05),说明jlVLCAD的表达水平不受C22和C18的影响。之后,进行一周的饥饿胁迫,发现肌肉中jlVLCAD的表达量显著上升(P<0.05),同样进行低温应激,也发现肌肉中jlVLCAD的表达量上升明显(P<0.01),这都表明了饥饿胁迫和低温应激都能促进脂肪酸β氧化。脂肪含量是鱼类选育的重要标准,本文利用生物电阻抗法(BIA),计算出建鲤背部肌肉脂肪成分的相对含量,并以此为基础性状进行SNP筛选。VLCAD与脂肪酸代谢密切相关,本实验在建鲤VLCAD-a中筛选出4个可检测的SNP位点,除了G1031T是内含子上的SNP位点外,G44T、T81A、T57C都存在于外显子上,且都不改变氨基酸结构,为沉默突变,通过PCR-RFLP检测,进行相关性分析后发现,只有G44T与建鲤脂肪含量差异显著CP<0.05),对G44T位点进行组内分析发现,GG型的建鲤比TG型的建鲤的脂肪相对含量更加高,差异极其显著(P<0.01),说明了该突变位点可能对脂肪含量的调节有一定的影响。