论文部分内容阅读
目的：检测高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染的宫颈癌组织中总体甲基化水平（LINE-1）及抑癌基因（RASSF1A和hMLH1）甲基化水平，并探讨其与宫颈癌发生、发展的关系。 方法：收集HR-HPV均为阳性的正常宫颈组织(正常组)、宫颈鳞状细胞癌组织（鳞癌组）各30份，宫颈腺癌组织（腺癌组）20份。采用亚硫酸氢盐转化结合焦磷酸测序技术对所有组织DNA的LINE-1基因进行甲基化检测，同时联合甲基化特异性PCR对所有组织的RASSF1A及hMLH1基因进行甲基化检测，对比分析其检测结果。应用SPSS17.0软件对计量资料进行两独立样本资料的t检验、Wilcoxon非参数秩和检验、单因素方差分析或Kruskal-Wallis非参数秩和检验，对率的比较采用χ2检验，绘制RASSF1A及hMLH1基因用焦磷酸测序技术诊断宫颈腺癌的受试者工作特征曲线（ROC）。 结果: 1.正常组、鳞癌组及腺癌组中 LINE-1基因用焦磷酸测序技术检测的甲基化水平(％)分别为58.71±5.310、49.30±5.402、47.25±5.176，鳞癌组及腺癌组中LINE-1基因甲基化水平均低于正常组（P均＜0.001）。宫颈癌组织LINE-1基因启动子甲基化水平与其临床病理特征无明显相关(P均＞0.05)。 2.正常组、鳞癌组及腺癌组中RASSF1A基因用焦磷酸测序技术检测的甲基化水平(%)分别为1.17(1.00~1.33)、1.33(0.96~1.67)、5.75(3.30~6.46)，hMLH1基因的为1.00(0.50~1.50)、1.13(0.69~1.50)、6.25(2.31~10.31)。腺癌组中RASSF1A及hMLH1基因甲基化水平均高于正常组与鳞癌组（P均<0.001）；正常组、鳞癌组及腺癌组中 RASSF1A基因用甲基化特异性 PCR检测的甲基化阳性率(%)分别为0.00、10.00、60.00，hMLH1基因的为0.00、6.67、50.00。腺癌组中RASSF1A及hMLH1基因甲基化阳性率高于正常组与鳞癌组（P均<0.05）。RASSF1A基因启动子甲基化水平及甲基化阳性率在Ⅱb-Ⅳ期、有淋巴结转移、G3组织学分级的宫颈癌中均明显升高(P均<0.05)，hMLH1基因启动子甲基化水平及甲基化阳性率在Ⅱb-Ⅳ期的宫颈癌中明显升高(P<0.05)。 3.用焦磷酸测序技术检测宫颈腺癌组织的甲基化水平，在正常组与腺癌组中选取 RASSF1A及 hMLH1基因启动子区甲基化水平诊断宫颈腺癌的截断值（%）分别为2.67、1.88，在鳞癌组与腺癌组中分别为3.09、2.13。 结论： 1.宫颈癌的LINE-1基因启动子区存在低甲基化现象； 2.RASSF1A及hMLH1基因启动子区的高甲基化现象与宫颈腺癌的发生相关，为宫颈腺癌的特异性生物学标志物； 3.RASSF1A及hMLH1基因启动子区的甲基化水平对子宫颈癌的疾病进展有一定的提示作用； 4.亚硫酸氢盐转化结合焦磷酸测序技术与甲基化特异性 PCR在基因甲基化检测结果上有高度的统一性，且焦磷酸测序技术有定量检测，操作快速、简便、高效、高特异性、高通量，更适合运用于诊断宫颈癌。