论文部分内容阅读
目的：通过分析结直肠腺癌组织中TGF-β1、E-cadherin和Vimentin的表达与临床病理资料的关系,以及TGF-β1在人结肠癌细胞HCT116上皮间质转化的作用,和PI3K/Akt信号通路在TGF-β1诱导人结肠癌细胞HCT116上皮间质转化过程中的作用,拟探讨结直肠腺癌侵袭转移的一个可能机制,并对结直肠腺癌的治疗提供理论依据。方法：1.采用免疫组织化学技术检测52例手术切除的结直肠腺癌组织及其癌旁黏膜中TGF-β1、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达情况。。2.应用TGF-β1,TGF-β1联合PI3K/Akt通路特异性抑制剂LY294002刺激培养人结肠癌细胞HCT116,以PBS作空白对照。(1)采用倒置显微镜观察人结肠癌细胞HCT116形态学变化；(2)采用免疫细胞化学技术检测人结肠癌细胞HCT116的p-Akt蛋白表达改变；(3)采用免疫细胞化学技术、RT-PCR方法检测人结肠癌细胞HCT116的E-cadherin和Vimentin表达改变。结果：1.TGF-β1蛋白在结直肠腺癌中的阳性表达率(73.08%)明显高于其癌旁黏膜中的阳性表达率(32.69%,P=0.00)。2.E-cadherin蛋白在结直肠腺癌中的阳性表达率(48.08%)明显低于其癌旁黏膜中的阳性表达率(76.92%,P=0.00),Vimentin蛋白在结直肠腺癌中的阳性表达率(23.08%)明显高于其癌旁黏膜中的阳性表达率(0.00%,P=0.00)。3.在结直肠腺癌组织中,TGF-β1蛋白的表达与E-cadherin的表达呈负相关(Tb=-0.55,P=0.00),且与Vimentin的表达呈正相关(Tb=0.33,P=0.02),E-cadherin的表达与Vimentin的表达呈负相关(Tb=-0.33,P=0.02)。4.无TGF-β1刺激下的人结肠癌细胞HCT116呈铺路石状,TGF-β1(10ng/ml)作用48小时后人结肠癌细胞HCT116失去原来的整齐排列,细胞间隙增宽,出现明显的梭形改变,且细胞异性型增大。5.TGF-β1(10ng/m1)刺激48小时后,免疫细胞化学检测结果表明,E-cadherin蛋白的阳性表达率(39.00%)明显低于对照组(57.10%,P<0.05),Vimentin蛋白的阳性表达率(52.80%)明显高于对照组(42.00%,P<0.05)。RT-PCR检测结果表明,E-cadherin mRNA的表达在TGF-β1组(1.51±0.06)明显低于对照组(1.63±0.05,P<0.05),Vimentin mRNA的表达在TGF-β1组(3.04±0.11)明显高于对照组(1.66±0.09,P<0.05)。6.TGF-β1(10ng/ml)+LY294002联合刺激48小时后,免疫细胞化学检测结果表明,E-cadherin蛋白的阳性表达率(56.30%)明显高于TGF-β1组(39.00%,P<0.05),Vimentin蛋白的阳性表达率(42.60%)明显低于TGF-β1组(52.80%,P<0.05)。RT-PCR检测结果表明,E-cadherin mRNA的表达在TGF-β1+LY294002组(2.03±0.10)明显高于TGF-β1组(1.51±0.06,P<0.05),Vimentin mRNA的表达在TGF-β1+LY294002组(1.62±0.15)明显低于TGF-β1组(3.04±0.11,P<0.05)。结论：1.结直肠腺癌发生发展过程中存在EMT现象,TGF-β1可能在其中起着重要作用。2.TGF-β1可能通过一系列下游通路诱发人结肠癌细胞HCT116发生EMT。3.PI3K/Akt通路可能是TGF-β1诱导人结肠癌细胞HCT116EMT过程中的重要通路之一通过特异性阻断其通路可能逆转TGF-β1诱导人结肠癌细胞HCT116EMT过程。4.PI3K/Akt信号通路的阻断可能成为结直肠腺癌药物治疗的靶向,为结直肠腺癌治疗提供可能的理论依据,并可望为结直肠腺癌治疗提供一种新的思路。