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有机磷阻燃剂是大量生产和使用的一类化学物质,主要作为溴代阻燃剂的替代品,在环境中广泛存在,是新兴的有机污染物。本论文以典型有机磷阻燃剂,磷酸三(1,3-二氯异丙基)酯(TDCPP)为对象,研究了其对斑马鱼的内分泌干扰以及神经毒性效应。 1.完成了短期暴露TDCPP对斑马鱼的发育毒性效应和甲状腺内分泌干扰效应,即将斑马鱼胚胎(从受精后2小时,hpf)暴露于TDCPP(10,50,100,300和600μg/L)至144-hpf。结果表明TDCPP引起发育毒性效应(抑制生长,孵化率、存活率以及心率下降,畸形率增加),改变下丘脑-脑垂体-甲状腺轴(HPT轴)中与甲状腺合成、代谢、转运等功能相关的基因表达,并减少了斑马鱼仔鱼整体甲状腺激素T4含量,增加了T3含量。 2.完成了长期低剂量暴露对斑马鱼的神经毒性效应。斑马鱼胚胎(2-hpf)暴露于TDCPP(0,4,20和100μg/L)6个月至性成熟。在早期发育阶段暴露期间(即受精后5天),TDCPP并不影响仔鱼的运动行为,乙酰胆碱酯酶活性,神经递质含量以及神经发育相关基因、蛋白的表达,表明TDCPP并没有急性神经发育毒性效应。然而,暴露6个月的成鱼中,雌鱼大脑中的多巴胺和五羟色胺的含量显著下降,而对雄鱼无明显作用。雌鱼和雄鱼大脑中的髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein)和微管蛋白(α1-tubulin)基因和蛋白表达均下降。化学分析表明,雌鱼体内和脑组织中TDCPP的含量高于雄鱼。本实验证明,长期低剂量暴露TDCPP能引起斑马鱼的神经毒性效应,并表现出性别差异的积累和毒性效应。 3.同时也检测了长期低剂量暴露对斑马鱼繁殖的影响。实验结果表明,TDCPP显著增加了雌鱼血清中雌激素(雌二醇)和雄激素(睾酮)含量,产卵量下降。主成分(PCA)分析表明性激素含量和繁殖都与下丘脑-脑垂体-性腺轴(HPG轴)中的主要基因(如fshβ, lhβ, gnrh2, lhr, activin-β2A,erα, erβ, vtg1,vtg3)相关。此外,雄鱼肝脏卵黄蛋白原(VTG)基因表达上调,说明TDCPP具有雌激素活性。组织学观察发现TDCPP促进了雌鱼卵母细胞的成熟,抑制了雄鱼精子发育。F1代卵直径下降,畸形率增加。化学分析表明,TDCPP及其代谢产物磷酸二(1,3-二氯-2-丙基)酯(BDCPP)也在雌鱼和雄鱼的性腺中蓄积。本实验证明,长期暴露的TDCPP也具有繁殖毒性效应。此外,TDCPP显著升高了雌鱼和雄鱼一相代谢酶的活性和相关基因的表达。化学分析检测到肝脏中有TDCPP以及高含量的BDCPP。结果表明,TDCPP主要在鱼类肝脏中蓄积和代谢。 4.完成了长期低剂量暴露TDCPP的传递毒性效应。斑马鱼成鱼(F0)暴露于TDCPP(0,4,20和100μg/L)3个月。实验发现,TDCPP在F0代成鱼体内积累,同时也在子代鱼卵(F1)中检测到很高含量的TDCPP,证明TDCPP可经由母代暴露、积累而传递给未暴露的子代(F1)。在未暴露的子一代(F1)中活性氧(ROS)升高,存活率下降。此外F1代中神经发育相关的基因和蛋白表达以及神经递质的含量减少,并且幼鱼的运动显著降低。我们在F0代雌鱼和F1代胚胎/仔鱼中观察到了血清T4和T3含量的减少。结果表明,TDCPP暴露的母代可以将TDCPP传递到子代,并且引起未暴露子代的甲状腺内分泌干扰和发育神经毒性。