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目的:研究血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响并初步探讨其机制。
方法:将培养的大鼠肾系膜细胞用无血清的RPMI-1640培养液制成5×104/mL的细胞悬液，接种在96孔板中，每孔加入细胞悬液100μL无血清培养24小时，使其生长同步化。当细胞生长融合至70％左右时，按以下分组加入不同干预因素。A组(对照组):GMC培养液中不加入干预因素；B组(TGF-β1组):GMC培养液中加入TGF-β1(终浓度5ng/ml；C组[Ang-(1-7)组]:GMC培养液中加入Ang-(1-7)(终浓度10-6 mol/L)；D组[TGF-β1+Ang-(1-7)组]:GMC培养液中加入TGF-β1(终浓度5ng/ml)及Ang-(1-7)(终浓度10-6m0l/L)。(1)WST法检测GMC增殖；药物干预24小时后，每孔加入WST 10μL，37℃继续孵育4h，在酶联免疫检测仪上490nm波长处测定OD值。(2)RT-PCR法检测Smad3/7及CTGF等基因mRNA的表达。实验分组及药物干预浓度同上，将培养的GMC接种在6孔板中，当细胞生长融合至70％左右时进行药物干预，干预24小时后，按RNA提取试剂盒说明书提取各组细胞总RNA，逆转录为cDNA后进行PCR反应。PCR反应结束后取产物15μL于1.5％琼脂糖凝胶中以100V电压进行电泳，5×TBE作为电泳缓冲液，电泳时间为40min，用凝胶成像扫描及分析系统，测定各组目的基因与内参基因的积分光密度比值。实验结果用均数士标准差(X±S)表示，采用单因素方差分析(F检验和q检验)进行组间比较，P<0.05表示差异有显著性。采用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果:(1)WST法检测GMC增殖结果:与对照组相比，TGF-β1(5ng/ml)可明显促进GMC增殖(P<0.05)；Ang-(1-7)(10-6mol/L)则可明显抑制基础状态下的GMC增殖(P<0.05)；同时Ang-(1-7)对TGF-β1的促细胞增殖作用也有显著的抑制作用(P<0.05)；(2)Smad3/7，CTGF mRNA表达结果:与对照组相比，TGF-β1(5ng/ml)可明显促进GMC Smad3，Smad7，CTGF mRNA的表达(P<0.05)；Ang-(1-7)(10-6mol/L)则明显抑制基础状态下GMC Smad3，CTGF mRNA的表达(P<0.05)，但对基础状态下的Smad7 mRNA表达无明显的影响(P>0.05)；Ang-(1-7)对TGF-β1所诱导的Smad3，Smad7，CTGF mRNA的表达均有明显的抑制作用(P<0.05)。结论:①Ang-(1-7)可抑制基础状态下及TGF-β1诱导的GMC增殖。②Ang-(1-7)可抑制基础状态下Smad3，CTGF mRNA的表达，但对基础状态下的Smad7 mRNA表达无明显抑制作用。③Ang-(1-7)可抑制TGF-β1诱导的Smad3，Smad7，CTGF mRNA的表达。④Ang-(1-7)通过非特异性下调正性信号分子Smad3及负性信号分子Smad7，导致细胞内Smad3/Smad7的平衡被打破，引起CTGF表达减少，可能是其抑制TGF-β1诱导的GMC增殖的作用机制之一。