目的研究锌簇转录因子Mrr2p错义突变与白念珠菌氟康唑耐药间的关系。方法1.收集临床分离的白念珠菌菌株,用微量肉汤稀释法(CLSI M27-A3)检测菌株氟康唑敏感性,确定菌株的氟康唑MIC值。2.以临床氟康唑敏感菌株为基准,用RT-PCR法检测氟康唑敏感性降低菌株的外排泵编码基因CDR1和CDR2相对表达水平。3.对CDR1高表达的临床氟康唑敏感性降低菌株及氟康唑敏感菌株的MRR2基因进行测序,探索MRR2基因可能存在的功能获得性点突变。同时对CDR1或CDR2高表达的临床氟康唑敏感性降低菌株的TAC1基因进行测序,检测菌株中是否存在已经报道的Tac1p功能获得性点突变。4.利用白念珠菌基因敲除、基因定点突变及基因异位回复技术构建MRR2基因定点突变的白念珠菌菌株,检测点突变菌株的氟康唑MIC值和CDR1、CDR2基因相对表达水平。5.用MLST分型技术对出现MRR2错义突变的菌株进行分型,分析菌株间的亲缘性关系。结果1.在29株临床白念珠菌菌株中,20株为氟康唑敏感性降低的菌株,9株为氟康唑敏感菌株。2.在20株氟康唑敏感性降低的菌株中,12株伴随CDR1基因高表达,16株伴随CDR2基因高表达,17株伴随CDR1或CDR2基因高表达。3.12株CDR1高表达菌株的MRR2基因测序结果显示,有三株菌(C7、C9和C15)同时存在11个相同的错义突变,其中6个(H358N、E439K、S466L、A468G、S469T、T470N)仅出现在氟康唑敏感性降低的菌株中;17株CDR1或CDR2基因高表达的临床菌株,其TAC1测序结果表明,有8株存在已经报道的功能获得性点突变A736V或R693K。4.与亲本菌株SN152相比较,MRR2基因定点突变菌株表现出不同程度的氟康唑MIC值升高和CDR1基因高表达,尤其是临床菌株C9的MRR2基因重组构建菌株,其氟康唑MIC值升高了8倍,CDR1相对表达量增加了近6倍。5.菌株C7、C9和C15的MLST分型结果表明,这三株菌属于一个克隆簇,各自之间的亲缘关系非常接近。结论白念珠菌锌簇转录因子Mrr2p错义突变与氟康唑耐药有关,Mrr2p错义突变介导菌株耐药的机制部分依赖于CDR1高表达,与CDR2基因无关;重组构建菌株的氟康唑MIC值及CDR1表达量在多个错义突变同时存在时增高明显,但仅有单个点突变存在时增高相对减低甚至不明显;相对于锌簇转录因子Tac1p,Mrr2p在临床白念珠菌菌株中的错义突变率明显降低,Mrr2p错义突变不是介导白念珠菌唑类药物耐药非常常见的因素。