目的:通过检测茄病镰刀菌刺激小鼠角膜基质细胞后Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)的表达分布状况,以及TLR4与炎性因子分泌的关系,探讨TLR4在真菌性角膜炎中的作用。方法:1.应用消化法对小鼠角膜基质细胞进行原代培养;分别采用波形蛋白单克隆抗体、角蛋白12多克隆抗体进行免疫荧光细胞化学染色鉴定;倒置相差显微镜下观察细胞体外生长特性;MTT比色法绘制细胞生长曲线。2.制备茄病镰刀菌液;MTT法观察茄病镰刀菌液刺激对角膜基质细胞生长作用的影响。3.免疫组化、RT-PCR测定刺激后不同时间点角膜基质细胞TLR4的表达。4. ELISA检测封闭TLR4对茄病镰刀菌液诱导的角膜基质细胞分泌TNF-α、IL-8的影响。结果:1.采用消化法1～2d培养出小鼠角膜基质细胞;抗波形蛋白免疫荧光染色阳性证实所培养的细胞为角膜基质细胞;细胞生长曲线近似“S”形。2.在茄病镰刀菌液刺激角膜基质细胞48h后,MTT法显示刺激组较对照组A值明显的下降。3.正常角膜基质细胞TLR4在蛋白及mRNA水平呈弱表达,茄病镰刀菌液刺激3h可明显增加其表达,6h达到高峰,12h开始逐渐降低。4.茄病镰刀菌液可上调角膜基质细胞TNF-α、IL-8的分泌,刺激3h、6h、12h的TNF-α、IL-8的浓度与TLR4 mRNA的表达呈明显的正相关(P<0.05);预先用TLR4中和抗体封闭TLR4,可明显降低TNF-α、IL-8的分泌。各时间组间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TLR4可能在角膜识别真菌感染、介导炎性防御反应过程中起到重要的作用。