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激光照射可以调节很多生物过程,比如它可以诱导细胞的增殖、分化、凋亡等等。但是激光生物效应的机制至今仍不清楚.本论文主要利用Cell CountingKit-8测定细胞存活率的方法研究了不同剂量激光照射对人类肺腺癌细胞(ASTC-a-1)生长的影响;利用激光共聚焦扫描显微镜结合各种荧光染料探针和荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术研究了激光照射生物效应的分子机制。这对于更好地阐明激光生物效应及其机制,指导激光更好地应用于临床具有重要的意义。 论文绪论部分介绍了激光生物效应及其机制研究的现状,同时说明了本课题的研究目的与意义;接着本文对激光共聚焦扫描显微镜及FRET技术的原理和应用进行了概况性的介绍。 在第一部分的实验工作中,我们利用Cell Counting Kit-8测定细胞存活率的方法对不同剂量激光照射对ASTC-a-1细胞生长的影响进行了研究。结果发现小剂量的He-Ne激光照射(0.48J/cm2-0.8J/cm2)能促进ASTC-a-1细胞增殖;大剂量的He-Ne激光照射(60J/cm2-120J/cm2)能诱导ASTC-a-1细胞凋亡。 在第二部分的实验工作中,我们利用基于探针RaichuRas的FRET技术在活细胞内实时观测了0.8J/cm2激光照射诱导细胞增殖过程中Ras和Raf相互作用的动态过程。结果表明:小剂量激光照射诱导ASTC-a-1细胞增殖过程中Ras/Raf被激活。我们的研究表明Ras/Raf信号通路蛋白的激活在小剂量激光照射诱导细胞增殖过程中确实扮演了重要的角色,是小剂量激光照射诱导细胞增殖的机制之一。 在第三部分的实验工作中,我们利用激光共聚焦扫描显微镜结合荧光染料探针和FRET技术,对大剂量激光照射诱导细胞凋亡的分子机制进行了研究。在120J/cm2的He-Ne激光照射诱导ASTC-a-1细胞凋亡的过程中,我们用H2DCFDA来检测细胞内活性氧(ROS)的产生;用Rhodamine123来监测细胞内线粒体膜电位(△Ψm)的变化;用MitoTrack Deep Red 633来定位线粒体;用基于SCAT-3和