盐酸药根碱对前列腺癌的抑制作用及分子机制研究

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目的:探讨盐酸药根碱(Jatrorrhizine hydrochloride,JH)在细胞层面对前列腺癌细胞增殖、平板克隆形成、迁移侵袭及凋亡的影响。在动物层面探讨盐酸药根碱对皮下荷瘤裸鼠的影响,并进一步探讨其部分分子机制。方法:体外培养前列腺癌PC-3细胞,通过分子对接探讨药物与蛋白复合物间是否存在结合作用;采用MTT法检测不同浓度的盐酸药根碱在24、48 h对PC-3细胞增殖的影响;采用平板克隆形成实验检测盐酸药根碱对前列腺癌PC-3细胞克隆形成的影响;采用细胞伤口愈合实验及Transwell细胞迁移实验检测盐酸药根碱对PC-3细胞横向、纵向迁移能力的影响;采用Transwell细胞侵袭实验检测盐酸药根碱对PC-3细胞侵袭能力的影响;Hochest 33342染料检测盐酸药根碱是否促进PC-3细胞发生凋亡。将PC-3细胞接种至裸鼠皮下,构建裸鼠皮下荷瘤模型,通过与空白对照组比较观察盐酸药根碱对裸鼠皮下荷瘤增殖能力的影响。通过HE染色及免疫组化实验来验证盐酸药根碱对体内脏器有无毒性反应以及可能存在的作用机制。通过Western blot检测不同浓度的盐酸药根碱对PC-3细胞中EMT相关蛋白表达水平的影响以及对癌基因MTA1的表达是否发生变化。结果:MTT、平板克隆实验结果表明盐酸药根碱可对前列腺癌PC-3细胞发挥抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;细胞伤口愈合实验和Transwell迁移、侵袭实验显示盐酸药根碱能够以剂量依赖性地方式抑制PC-3细胞的横向及纵向迁移以及侵袭能力;Hochest 33342凋亡染色实验显示盐酸药根碱可以促进PC-3细胞凋亡,并具有浓度依赖性。裸鼠皮下荷瘤结果显示,盐酸药根碱给药组裸鼠皮下肿瘤生长速度明显慢于空白对照组,且肿瘤体积小于空白对照组,说明盐酸药根碱抑制PC-3细胞在裸鼠皮下肿瘤的生长速度。HE染色和免疫组化实验结果显示,给药盐酸药根碱对裸鼠的心、肝、脾、肺、肾并未表现出明显毒性并且其对EMT标志性蛋白的表达具有一定影响。此外,分子对接结果发现盐酸药根碱与MTA1蛋白复合物间存在较强结合。Western blot结果显示,与空白对照组相比,给药组中MTA1表达呈现明显下调趋势,且随药物浓度增加,下调趋势越明显,此外,盐酸药根碱还可以抑制EMT中关键蛋白N-Cadherin,snail的表达,并上调E-Cadherin的表达。结论:本实验通过体外细胞实验和体内动物实验表明,盐酸药根碱可以结合MTA1蛋白复合物抑制细胞的EMT进程进而抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖、侵袭和迁移能力且无明显毒副作用。
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