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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的一种以感染猪发热、厌食,妊娠母猪繁殖障碍,仔猪呼吸障碍为特征的高度传染性疾病。此病常为地方流行性,给养猪业造成巨大的危害。我国因为养猪产业化程度低,综合防制技术水平不高,PRRS的控制依赖于免疫接种,成为我国相当长一段时间内防制PRRS所不得不面对的事实。蜂胶具有抗菌、抗病毒及增强机体免疫功能等作用;蜂胶颗粒能与抗原相互交联成具有抗原“仓库”和类免疫刺激作用的复合物结构,可以起到免疫增强剂的作用。为了研究PRRS疫苗的免疫效力,找到能够控制该病的有效途径,本次实验以蜂胶作为免疫佐剂,按专有技术与PRRSV融合得到PRRS蜂胶佐剂灭活疫苗,与油乳佐剂灭活苗对比进行了研究。1. PRRS蜂胶佐剂灭活疫苗对体液免疫水平的影响选用50日龄仔猪15头,随机分为3组。分别注射1倍剂量的PRRS蜂胶佐剂灭活疫苗;PRRS油乳剂灭活疫苗;等量生理盐水。分别于注射后7 d、14 d、21 d、28 d、42 d、60 d采血检测ELISA抗体和中和抗体。结果显示,两组具有相似的ELISA抗体消长规律,但蜂胶组所诱导的ELISA抗体水平一直高于油苗组;蜂胶组所诱导的中和抗体产生更迅速,水平更高。2.PRRS蜂胶佐剂灭活疫苗对细胞免疫水平的影响分组同上。并于免疫前、免疫后7 d、14 d、28 d、42 d采集颈静脉血,进行外周血淋巴细胞表面CD3+、CD4+、CD8+的流式细胞术检测。结果显示,对照组CD3+、CD4+、CD8+细胞亚群比例值在整个试验期基本保持不变。蜂胶组与油苗组比较,可以促使CD3+细胞亚群比例值上升迅速且高峰期的数值更高。蜂胶组和油苗组的CD4+细胞亚群比例值上升速度相似,在高峰期时蜂胶组的比例值明显高于油苗组。免疫后0～7 d试验组CD8+细胞亚群比例均呈下降趋势,但7 d后的试验期内又均呈缓慢上升趋势,其中蜂胶组CD8+细胞亚群比例值上升速度较快,且其数值远高于油苗组。3.竞争性RT-PCR方法的建立及其对猪IFN-γmRNA的定量检测无菌分离猪外周血单个核细胞,体外刺激培养15 h后提取细胞总RNA。采用RT-PCR技术扩增得到435 bp的IFN-γ基因片段。将其与pMD18-T载体连接,构建pMD-IFN435重组质粒。然后对其进行基因缺失,得到含有367 bp目的片段的重组质粒pMD-IFN367,即内标准DNA模板。以定量后的pMD-IFN367与2倍梯度稀释的pMD-IFN435进行竞争PCR扩增,建立了能够准确、定量检测猪IFN-γmRNA的标准竞争曲线的线性回归方程(y=0.414x-1.864)。取待测样品按照以上步骤获得反转录产物,与定量后的pMD-IFN367质粒进行竞争PCR扩增。记录pMD-IFN435与pMD-IFN367的光密度比值,结合标准竞争曲线,得到待测样品中IFN-γmRNA的含量。在免疫后至第14 d,油苗组和蜂胶组的IFN-γmRNA量比较相似,但第14 d后油苗组的上升较为缓慢;蜂胶组以较快的速度迅速上升,第42 d时可达2.5632×108/μL。综上所述,蜂胶佐剂疫苗与油佐剂疫苗比较,免疫后不仅能够得到更高水平的ELISA抗体,更能够有效地诱导机体产生特异性中和抗体,对机体起中和保护作用。同时,蜂胶佐剂可以更有效地刺激机体产生T淋巴细胞,提高细胞免疫水平。免疫后IFN-γ含量明显增多进一步证明了其对机体非特异性免疫能力的增强作用。蜂胶佐剂灭活疫苗是一种值得普及推广的新型疫苗,这为PRRS疫苗的研究提供了新的思路。由此证明,蜂胶佐剂作为一种新型免疫增强剂具有广阔的应用前景,蜂胶佐剂灭活疫苗的研制及其效力研究也为PRRS的防制提供了科学依据。