灰霉（Botrytis cinerea）是全球第二大真菌病原菌,B.cinerea侵染给草莓产量和品质带来严重影响,开发天然无公害的B.cinerea抑制剂很重要。天然提取物绿原酸具有广谱抗菌活性。本论文以草莓为研究对象,探究绿原酸对B.cinerea的抑制作用及机理,为草莓采后保鲜剂的开发提供了思路,为防治灰霉病提供了实例。本论文评价了绿原酸对草莓灰霉病发病率和病情严重度的影响,检测了绿原酸对B.cinerea细胞膜完整性、细胞质和线粒体钙离子浓度、钙调蛋白及钙调神经磷酸酶基因表达、线粒体活性氧、细胞活力以及内质网应激的影响,构建了B.cinerea Rho1和Mid1原核表达载体,在大肠杆菌Rosetta菌株中诱导目的蛋白表达,利用绿原酸的荧光特性探究目的蛋白与绿原酸的体外结合情况。研究结果显示,绿原酸可通过影响B.cinerea钙稳态降低其致病力,延缓草莓灰霉病的发生。一方面,绿原酸影响B.cinerea胞内细胞器的钙分布,诱导B.cinerea菌丝内质网应激,使钙离子从内质网流入细胞质,进而进入线粒体。线粒体钙超载引起钙-钙调蛋白-钙调神经磷酸酶级联反应和线粒体超氧化物爆发,造成B.cinerea细胞活力下降。另一方面,绿原酸阻碍B.cinerea胞外钙摄入,外源性钙可以降低绿原酸对B.cinerea的生长抑制。成功构建的pET-28a::BcMid1、pET-28a::BcRho1重组载体可以在E.coli Rosetta菌株中表达Mid1和Rho1蛋白,SDS-PAGE发现绿原酸和Mid1蛋白可以结合,和Rho1蛋白无明显作用,荧光定量检测发现绿原酸与Mid1蛋白的结合常数为3.93×10~4 mol/L。该研究表明绿原酸可用于改善草莓采后灰霉病的发生,证明绿原酸对B.cinerea的抑制与内质网应激和钙摄入相关,且钙通道Mid1蛋白是绿原酸的潜在作用靶点。论文揭示了绿原酸抗B.cinerea的潜在机理。