论文部分内容阅读
本试验通过Ussing Chamber技术、荧光定量PCR和Western blot方法分别测定肠道电生理学参数变化、肠道感应因子mRNA相对表达量和肠道mTOR通路的变化,旨在研究适当降低日粮蛋白水平,并增加过瘤胃葡萄糖和添加NCG对绒山羊机体代谢及肠道营养物质感应的影响。整体试验结果显示,适宜降低日粮蛋白水平对机体代谢无显著影响,但是增加适量的过瘤胃葡萄糖(20g/d)并添加NCG后对绒山羊机体代谢及肠道营养物质感应均有促进作用,为日粮中蛋白(氨基酸)和葡萄糖对机体互作效应提供理论基础,促进碳水化合物和功能性氨基酸对日粮的调控技术研究层次从单一化向多方位快速转换,同时也为精确配制日粮,节约日粮成本,减少对环境污染提供新思路。本试验由以下5个部分组成:试验1不同蛋白水平日粮中过瘤胃淀粉量的测定、十二指肠所灌注葡萄糖量的确定及其对绒山羊机体代谢的影响选用27只体况良好,体重为50.07+5.97有永久性瘤胃瘘管和十二指肠瘘管的内蒙古白绒山羊半同胞羯羊,按体重随机分为3组:低氮组(CP:10.5%)、低氮+NCG组和高氮组(CP:13.5%),结果表明:淀粉的摄入量随着日粮中蛋白水平的降低而增加,且低氮组和低氮+NCG组全消化道的淀粉消化率显著高于中氮组;并根据王玲,任莹、韩非等测定的过瘤胃葡萄糖量来进行计算该3种日粮的过瘤胃葡萄糖量,并确定十二指肠葡萄糖的灌注量为0、20和40g/d。进一步研究结果:基础日粮条件下,微生物蛋白合成量随着日粮蛋白水平的降低而下降,低氮和低氮+NCG组沉积氮含量显著高于高氮组;在低氮日粮水平下增加过瘤胃葡萄糖的量有助于绒山羊氮的沉积,而灌注的量以不超过20g/d为宜;在此基础上添加NCG后的日粮对绒山羊氮代谢的促进作用更为明显。试验2日粮不同处理对绒山羊小肠电生理学指标的影响试验分组及饲养管理同试验1。饲养试验结束后,每个试验组随机选取一只羊进行屠宰。屠宰后,取近空肠中段约10cm,用温生理盐水冲洗干净后,迅速将空肠分为长度约2cm的肠段,利用Ussing Chamber技术来测定各试验组电生理学参数的变化。结果表明:绒山羊空肠组织的短路电流和组织导咆性随着日粮蛋白水平降低而增加(降低日粮蛋白水平促进小肠对葡萄糖的转运能力),低氮饲喂条件下,增加过瘤胃葡萄糖并添加NCG后促进绒山羊小肠葡萄糖转运能力。试验3日粮不同处理对绒山羊小肠mTOR信号通路的影响试验羊只在饲养试验结束后进行屠宰,分别采空肠和十二指肠样品。通过Western blot来测定不同日粮蛋白、葡萄糖水平及加NCG对绒山羊小肠mTOR信号靶分子4E-BP1和p70S6K磷酸化的进行测定。结果显示,基础日粮条件下,降低日粮中蛋白水平将抑制mTOR下游分子的磷酸化,而适当的添加NCG和增加过瘤胃葡萄糖后能够有所改善。试验4日粮不同处理对绒山羊小肠SGLT1、GLUT2、SLC7A1、SLC7A9、T1R1、T1R2. T1R3mRNA相对表达量、血液理化指标和相关激素含量的影响试验羊只在饲养试验结束时采集其血浆和血清样品,进行血浆理化指标和血清激素相关指标测定,屠宰后,分别采空肠和十二指肠样品,用于分析不同日粮蛋白、葡萄糖水平及加NCG对绒山羊小肠中葡萄糖、氨基酸转运载体及营养感应因子mRNA相对表达量的影响。结果表明:在基础日粮条件下,随着蛋白水平的下降,葡萄糖转运载体SGLT1的mRNA表达量、血浆尿素氮和瓜氨酸含量、血糖浓度和胰岛素水平、葡萄糖依赖型激素减少,而氨基酸转运载体SLC7A9和SLC7A1的mRNA表达量增加;增加适宜过瘤胃葡萄糖后,低氮组SGLT1和T1R1、T1R2、T1R3mRNA表达量与高氮组相比呈增加趋势;且低氮+NCG组20g/dG组最佳;试验5不同NFC/NDF比例日粮对绒山羊小肠电生理学参数及mTOR信号通路的影响选用9只体况良好,体重为50.07±5.97有永久性瘤胃瘘管和十二指肠瘘管的内蒙古白绒山羊半同胞羯羊,按体重随机分为3组:A组(CP:10.59%, NFC/NDF:1.02);B组(CP:10.59%,NFC/NDF:0.81)和C组(CP:10.54%, NFC/NDF:0.83,添加0.2g/d NCG),每组3只。测定其小肠GT、Isc及mTOR下游分子4E-BP1和p70S6K的磷酸化程度,结果表明:同一氮水平条件下,增加日粮的NFC/NDF比例,对小肠电生理学参数没有显著影响;对绒山羊空肠和十二指肠的mTOR下游分子4E-BP1和p70S6K的磷酸化程度增强;而NFC/NDF低比例组添加NCG后有效改善:mTOR下游分子4E-BP1和p70S6K的磷酸化程度。