[目 的]乳腺癌是一种起源于乳腺终末导管小叶单元上皮细胞的恶性肿瘤,是女性最常见的恶性肿瘤,也是全球女性癌症死亡的主要原因,亟待我们继续深入研究乳腺癌进展相关机制,寻找出早期诊断以及治疗的分子靶标。文献报道在乳腺癌细胞中检测到GP5蛋白表达,但与正常乳腺组织间差异及其功能尚不明确。本研究旨在分析GP5在乳腺癌组织中的异常表达情况,GP5基因启动子区甲基化修饰与蛋白表达之间的调控关系,并深入研究GP5促进乳腺癌细胞增殖、侵袭以及迁移的分子机制,为乳腺癌的临床诊断和治疗提供新思路。[方 法]1.收集昆明医科大学第二附属医院病理科41例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织提取总RNA后采用QPCR检测GP5 mRNA的表达差异,通过免疫组织化学方法检测GP5蛋白表达量,并分析与临床病理特征的相关性;2.体外培养2种乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7细胞以及永生化人正常乳腺上皮细胞MCF-10A,同样使用QPCR检测GP5在三种细胞中mRNA表达量;3收集41例乳腺癌患者的癌组织和癌旁组织、19例导管原位癌组织、15例淋巴结转移灶组织提取DNA样本,经重亚硫酸盐处理后进行甲基化测序分析GP5启动子区甲基化情况;4.慢病毒转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231构建GP5过表达和敲低稳定细胞株,使用CCK-8、流式细胞术和划痕实验观察GP5过表达和敲低是否影响肿瘤细胞的相关生物学行为;5.采用高通量测序技术对GP5敲低稳定表达乳腺癌细胞和对照组细胞进行转录组测序分析比较,根据测序结果使用RT-PCR和Western Blot对相关信号通路进行验证。[结 果]1.GP5在乳腺癌组织中mRNA表达量(8.195±10.903)高于癌旁组织(1.480±3.541)(P<0.0001),并且GP5在乳腺癌组织中蛋白表达量(30.468±16.806)亦高于癌旁组织(4.421±3.286)(P<0.001);2.MDA-MB-231细胞 mRNA 表达量(2.139±0.114)、MCF-7 细胞 mRNA 表达量(6.746±0.517)均高于永生化人正常乳腺上皮细胞MCF-10A mRNA表达量(1.010±0.096)(P<0.01);3.GP5启动子区甲基化水平在导管原位癌(0.425±0.169)、浸润性乳腺癌(0.419±0.215)以及淋巴结转移灶组织(0.394±0.207)中均高于癌旁组织GP5启动子区甲基化水平(0.265±0.099)(P<0.05),同一患者的原发部位乳腺癌组织GP5启动子区甲基化水平(0.549±0.152)高于淋巴结转移灶GP5甲基化水平(0.414±0.134)(P<0.001),不同组织间还具有位点甲基化差异和特殊的甲基化单倍型;4.GP5表达水平与组织学分级、TNM分期呈正相关,而与Her-2表达负相关(P<0.05),但与患者年龄、是否绝经、肿瘤大小、脉管侵犯、神经侵犯、乳头侵犯、ER、PR、Ki-67以及淋巴结转移没有明显差异,GP5高表达患者无复发生存期短于GP5低表达患者,GP5高表达与患者不良预后相关;5.慢病毒转染乳腺癌细胞后,上调GP5实验组的CCK-8在450nm吸光度值在各观察时间点均高于对照组(P<0.05),下调GP5实验组则低于对照组(P<0.05);细胞周期检测结果显示上调或下调GP5实验组细胞周期与对照组无明显差异,细胞凋亡检测结果显示上调GP5实验组细胞凋亡率高于对照组,下调GP5实验组细胞凋亡率低于对照组细胞,但差异无统计学意义;细胞划痕实验显示,上调GP5实验组在24h、48h的细胞迁移率均高于对照组(P<0.001),下调GP5实验组在24h、48h时的细胞迁移率均低于对照组(P<0.001);6.高通量转录组测序显示,下调GP5乳腺癌组与对照组细胞共有差异基因141条,表达上调基因有128个,表达下调基因有13个;上调GP5的实验组细胞中PI3K mRNA表达量(3.053±0.033)和 AKT mRNA表达量(2.335±0.178)高于对照组(0.985±0.015)(0.915±0.085),P<0.001,下调的实验组细胞中PI3K和AKT mRNA表达量则低于对照组(P<0.05);上调GP5实验组细胞中N-Cadherin、Vimentin、MMP2以及MMP9蛋白表达量高于对照组(P<0.05),下调GP5实验组则低于对照组(P<0.05)。[结 论]1.GP5基因在乳腺癌组织中高表达,可能在乳腺癌中起到促癌基因的作用,且与组织学分级、TNM分期呈正相关,而与Her-2表达负相关;2.GP5基因启动子区甲基化异常并非是调控蛋白表达的主导因素;3.GP5可以促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭以及转移;4.GP5可能通过激活PI3K/AKT信号通路上调MET促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移,有望成为乳腺癌临床诊疗的潜在靶点。