膀胱癌是泌尿系中最常见的肿瘤，在我国发病率居泌尿系肿瘤首位，并且有恶性度高，易复发的特点。目前治疗以手术、化疗为主，但复发、转移率仍较高，晚期疗效差，需积极探讨新的治疗方法。 自杀基因疗法是目前有效治疗肿瘤中最有前景的基因治疗策略之一。葡萄糖醛酸苷酶（β-Glucuronidase，βG）是溶酶体中的酸性水解酶，参与机体的生理、病理及药物代谢等过程。它能够特异性水解葡萄糖醛酸苷糖甙键，释放出葡萄糖醛酸和配基。βG在ADEPT（抗体导向酶/前体药疗法）的应用研究中，已证实其前体药对肿瘤的选择性杀伤作用。将βG及前体药系统与基因治疗相结合，就有可能产生新的能够定向实施分子化疗的方法，用βG的相应前体药作用于βG高表达膀胱肿瘤，有可能起到杀伤肿瘤作用。为膀胱癌的治疗寻找一条新的、有效的途径。本实验进行了以下几方面研究： 1、利用质粒PGEM-4及pcDNA3.1（+）具有相同的EcoRI酶切位点，成功构建带βG基因的真核表达载体PcDNA3.1（+）-βG。 2、利用脂质体（LipofectAMINE）介导法将含有全长βG cDNA的真核表达载体pcDNA3.1（+）-βG转染至人膀胱癌细胞T24中，经G418筛选，获得了稳 第四军医大学硕士学位论文定转染 6 G基因的细胞克隆；通过 RNA打点杂交及原位杂交和免疫荧光、免疫组化、wes七ern Blot方法分别从帕A及蛋白水平证实p G基因己经稳定整合转入T24细胞基因组中并获得p G高表达，将稳定转染并高表达p G的转染细胞系命名为：T24什 G细胞。并通过光镜、电镜、细胞增殖周期检测等方法观察了p G转染的 T24／fi G细胞的生物学特性。 3、对pG前体药Epi－bUS作用于T24／pG细胞的体外效应进行了一系列研究，结果显示：稳定转染6 G基因的 T24／e G细胞对 Epi十US的敏感性比亲本细胞提高了 1000倍以上，IC。／半数抑制剂量）为 0．179／L。浓度为 2．929／L的Epi－b［JS作用4－5天对转染细胞的生长影响很小，但可将高表达p G的转染细胞全部杀死；0．2925／L的ESi－bus也能在6－7天内将转染细胞全部杀死，表现出明显的“自杀效应”；将T24／日G细胞与其末转染的亲本细胞T24以不同比例混合，观察了 Epi－blls对混合细胞的作用，结果示：当 T24旭 G细胞占川％～20％的时候，有70％～90％的混合细胞被杀死，说明有较强的旁观者效应。 上述研究表明：pG基因叩G前体药物系统可引入自杀基因治疗系统，脂质体－真核表达载体介导日G基因转染，结合使用日G前体药物，有望成为治疗膀脱癌的有效策略，为该系统治疗膀耽癌的临床应用提供了理论和实验依据。