电离辐射对PIG3基因表达的调控及机制研究

来源 :中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:cwy198783
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目的:研究0.05 Gy-10 Gy剂量范围电离辐射对PIG3基因mRNA表达的影响规律,探索建立一种新型生物剂量计的可能性;探讨电离辐射对PIG3基因表达的调控机制及生物学意义;了解不同肿瘤组织中PIG3基因的表达变化。方法:0.05、0.5、2、4、6、8、和10 Gy 60Coγ射线照射人淋巴母细胞AHH-1后4h,应用荧光实时定量PCR技术对PIG3基因mRNA表达水平进行相对定量分析,并用Northern blot进一步验证;Northern blot检测不同刺激因素对PIG3表达的影响;应用荧光报告基因分析和鉴定启动子活性;应用肿瘤谱阵列芯片对不同肿瘤组织及正常组织中PIG3基因的表达进行检测。结果:1)利用荧光实时定量PCR技术对PIG3基因辐射诱导表达的剂量效应规律进行了分析,结果表明,PIG3 mRNA表达水平具有显著剂量依赖性,在至少0.5~10Gy范围内,表达丰度随照射剂量的升高而上调,且4Gy照射后48h,PIG3基因的辐射诱导表达仍未见明显降低;2)Northern blot检测结果显示,电离辐射和过氧化氢对A549细胞中PIG3基因的表达均有诱导作用,而顺铂对A549细胞中PIG3基因mRNA表达水平无明显影响。与对照的人宫颈癌C33A-C(627)细胞相比,转染HPV E6蛋白的C33A-E6(673)细胞中p53蛋白水平显著降低、PIG3基因mRNA表达水平极低。3)构建了PIG3基因启动子的一系列突变体载体,通过牵引荧光报告基因表达分析,表明了辐射诱导PIG3基因表达可能主要由其中的微卫星序列介导;4)构建重组原核表达质粒pGEX-5T-PIG3,以谷胱甘肽琼脂糖亲和层析法,获得纯化的重组融合蛋白GST-PIG3,为功能研究奠定了基础;5)初步观察显示,与癌旁组织相比,肾癌细胞中PIG3基因表达显著下降。结论:发现了电离辐射对PIG3基因的诱导表达作用,揭示了该基因的辐射诱导表达具有良好的剂量效应关系,为进一步研究辐射生物学效应的分子机制、发展为新型生物剂量计奠定了基础。
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