家蚕生殖发育相关基因Bmvlg、Bmachi的研究

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生殖细胞的发生、发育是有性生殖动物胚胎发育中重要事件,在生物体发育进程中占有极其重要的地位。 果蝇vasa基因编码极质中重要的蛋白质成分,已知vasa基因变异,胚胎将不能形成生殖细胞。VASA蛋白作为生殖细胞的分子标记,特异性地存在于果蝇的生殖腺中。果蝇achi和vis编码高度相关的TGIF类似同源结构域蛋白,两者同时缺失的果蝇突变株中,雄性果蝇无精子发生分化信号,因而被认为是一种雄性减数分裂阻滞基因。 家蚕是鳞翅目昆虫的模式种,为了探讨家蚕生殖发育的分子机制,克隆了Bmvlg(Bombyx mori vasa-like gene)基因启动子,构建了由Bmvlg启动子驱动报告基因DsRed的瞬时表达载体,研究结果显示,Bmvlg启动子可以驱动DsRed在卵巢来源的BmN细胞和受精卵中瞬时表达;通过RT-PCR获得了Bmvlg基因由不同剪接产生的4个cDNA序列,推测Bmvlg基因可能存在着多种可变剪接;通过RT-PCR克隆了家蚕achi(Bmachi) cDNA基因,结果显示,Bmachi在家蚕雌雄性腺组织中均有表达,但雌雄之间存在不同于果蝇的剪接方式,且其丰度在雌雄间也存在差异;通过大肠杆菌成功表达了BmAchi,重组表达产物免疫小鼠制备了多抗,western blotting结果表明制备的抗体具有特异性;设计并合成Aehi-dsRNA,用RNAi初步研究了Bmachi基因的功能,结果显示,3-4龄幼虫期间注射Achi-siRNA-2( TCGCGTCGCTAACAGACAA)或 Achi-siRNA-1(GATAGTGACAATACGGAAA)的蚕蛾正常交配所产卵的不受精卵率分别达到23%,90%以上,表明家蚕Bmachi基因可能属于减数分裂阻滞基因,Bmachi基因的表达水平对配子发生和分化有显著影响。
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