论文部分内容阅读
目的：研究我院临床分离的产DHA-1型质粒AmpC酶(pAmpC)肺炎克雷伯菌染色体ampE基因多态性，分析其在pAmpC酶诱导表达调控中的作用。 方法：采用K-B纸片法，以头孢西丁(FOX)抑菌环直径≤17mm为标准，从住院患者临床标本中分离头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌菌株12株；经多重PCR和ampRC(ampC+ampR)全基因特异扩增确定10株为产DHA-1型质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌；以实验室保存的10株产DHA-1型质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌株(KP)和新分离的10株产DHA-1型质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌株(KPC)为研究对象，采用复合表型实验确定AmpC酶的耐药表型，并检测实验菌株对各抗生素的耐药性，观察有无超级耐药菌出现；提取20株实验菌株及实验室分离的全敏感肺炎克雷伯菌(KPS)的染色体DNA，设计特异性引物PCR扩增ampE基因，纯化并双向测序后与KPS菌株的ampE基因比对，分析其突变位点。利用SOSUI enginever.1.1对实验菌株AmpE蛋白进行跨膜结构预测(http：//bp.nuap.nagoya-u.ac.jp/sosui)，分析ampE基因突变对AmpE蛋白跨膜域的影响。结合MIC值、耐药表型、跨膜域特点、碱基突变结果来分析ampE基因突变对AmpC酶诱导表达调控的影响。 结果：20株产DHA-1型质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌及全敏感肺炎克雷伯菌染色体上均检出ampE基因，实验菌株与全敏感实验菌株比对其核苷酸突变位点共13个，其中无效突变8个、错义突变4个、碱基缺失导致移码突变1个；全部产酶株都有氨基酸Val93→Ala(缬氨酸93→丙氨酸)突变，多数同时伴Val31→Ala(缬氨酸31→丙氨酸)突变。跨膜结构预测结果为除菌株KP1、KP4碱基缺失导致移码突变而只有三个跨膜片段外，其他菌株均含有六个跨膜片段。 结论：肺炎克雷伯菌染色体上含有ampE基因，产DHA-1型质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌ampE基因具有基因多态性特点；肺炎克雷伯菌染色体ampE基因编码产物AmpE蛋白为跨膜蛋白，产DHA-1型质粒AmpC酶肺炎克雷伯菌ampE基因突变影响跨膜片段的形成。