研究背景 骨肉瘤(Osteosarcoma)是常见的骨恶性肿瘤，好发于儿童、青少年，是严重影响青少年身心健康的恶性肿瘤。 本研究目的在于探讨人骨肉瘤组织MICA mRNA和蛋白的表达情况，以及其与NF-κB、MMP-9表达间的相关关系，并通过功能实验验证NF-κB对MICA蛋白表达和脱落的调控机制，为骨肉瘤免疫治疗提供理论基础。全文共分为三章： 第一章骨肉瘤组织中MICA基因mRNA和蛋白的表达　　　　 　　目的：检测骨肉瘤组织中MICA基因mRNA和蛋白的表达情况，为探讨骨肉瘤的肿瘤免疫机制提供信息。 方法：1.应用RT-PCR方法检测MICA mRNA在11例新鲜骨肉瘤组织和5个骨肉瘤细胞株中的表达情况。 2.应用免疫组织化学方法检测66例骨肉瘤、11例骨母细胞瘤，8例骨化性纤维瘤和6例正常骨组织中MICA蛋白的表达情况，并用Westem blot方法检测9例新鲜骨肉瘤组织中MICA蛋白表达，以验证免疫组化结果的可靠性。采用流式细胞术检测5个骨肉瘤细胞株中膜表面MICA蛋白的表达情况。 结论： 1.MICA mRNA和蛋白广泛表达于骨肉瘤组织和细胞株。 2.MICA蛋白的表达上调可能与细胞的恶性转化有关。 3.骨肉瘤患者血清sMICA浓度升高。 4.骨肉瘤患者可能存在NKG2D-MICA介导的免疫监视功能障碍，MICA蛋白的持续性表达和脱落可能是骨肉瘤细胞逃避免疫监视的一个新机制。 第二章骨肉瘤组织中MICA、NF-κB和MMP-9蛋白表达的相关性 　　目的：探讨骨肉瘤组织中MICA、NF-κB和MMP-9蛋白表达间的关系，为研究骨肉瘤组织中MICA蛋白表达和脱落机制提供组织学依据。 方法：1.应用免疫组织化学方法检测66例骨肉瘤、11例骨母细胞瘤，8例骨化性纤维瘤和6例正常骨组织中NF-κB蛋白的表达情况，并检测66例骨肉瘤组织中MICA和MMP-9蛋白的表达情况。2.应用ELISA方法检测16例骨肉瘤患者血清中sMICA和MMP-9的含量。 结论： 1.NF-κ3表达上调和活化可能参与骨肉瘤的发生发展。 2.NF-κB表达上调和活化可能参与MICA蛋白的表达调控。 3.骨肉瘤组织中NF-κB对MICA、MMP-9的表达调控，以及MMP-9对sMICA形成的影响有待功能实验进一步验证。 第三章骨肉瘤细胞MICA蛋白表达和脱落机制 　　目的：探讨NF-κB活化对骨肉瘤细胞MICA蛋白表达和脱落的影响，以及MMP-9对sMICA形成的影响，为骨肉瘤免疫治疗提供理论依据。 方法：1.采用NF-κB经典活化剂肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)(20ng／mL)和活性抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)(10～50μM)作为诱导剂，研究NF-κB活化和活性被抑制后MICA、MMP-9、sMICA的变化情况。2.采用反义寡核苷酸技术下调MMP-9表达后检测sMICA的变化情况。3.应用Western blot方法检测MICA、NF-κB蛋白的表达；RT-PCR方法检测MICA和MMP-9基因mRNA表达；明胶酶谱法检测细胞培养上清液中MMP-9蛋白的活性；ELISA方法检测细胞培养上清液中sMICA含量。 结论： 1.TNF-α诱导骨肉瘤细胞U2OS表达MICA，并促进MICA蛋白脱落形成sMICA。 2.NF-κB活化可能参与TNF-α对骨肉瘤细胞MICA、MMP-9表达的诱导作用，但对MICA蛋白的脱落无明显影响。 3.MMP-9对MICA蛋白的水解脱落起一定作用，可能参与TNF-α对sMICA的诱导作用。 4.NF-κB和MMP-9都可作为侯选的骨肉瘤免疫治疗靶。