马铃薯Y病毒是引起烟草病毒病的主要病毒之一,可造成巨大经济损失。关于PVY的分子变异研究已经广泛开展,但对于中国分离物只有少数的几个PVY CP基因被测序,中国分离物地理来源之间有很大差异,可能含有较为丰富的变异类型,本试验的只要目的是以主要烟草产区的PVY分离物为材料,对其进行血清学和生物学鉴定,明确不同地区分离物的分子差异、株系种类和进化关系。同时制备高质量的PVY抗血清,为以抗体为基础的检测和实验方法提供保证。 将PVY毒原摩擦接种于白肋烟扩繁后,采用PEG沉降及超离心的方法进行病毒的提纯。提纯的病毒经电镜观察到大量线状病毒粒体,SDS-聚丙烯酰氨电泳结果显示提纯病毒的分子量为22KD,且杂蛋白较少。提纯病毒免疫动物,进行PVY抗血清的制备,经间接ELISA法测定血清效价为8192。新制备的血清与健康烟草和RSV,SCMV均无血清学反应且经Western检测验证有较好的特异性。 用新制备的抗血清对采集的烟草病毒病标样进行间接ELISA检测。有33个分离物与PVY抗血清呈阳性反应,将摩擦接种于白肋烟上后均能侵染烟草系统发病,发病症状主要分为两大类,叶脉坏死类和花叶类。 各烟草分离物的PVY CP基因经RT-PCR反应后均得到长度为804bp目的条带。RT-PCR产物经克隆测序后,进行多序列比对。所有烟草分离物的核苷酸序列整体同源性大于83.2%,氨基酸序列整体同源性大于87.6%。在33个发生改变的氨基酸位点中,有22个发生在N端,11个发生在C端。CP核心区域高度保守,大多数变异集中分布于一些突变热点区域。 依据41个中国分离物（8个来自GenBank）的PVY CP基因序列构建系统进化树。所有分离物的序列被分成3组,组内同源性明显高于组间,成簇分布趋势比较明显,其变异特征与地理来源之间没有必然的联系。来自世界上的105个PVYCP基因核苷酸序列（72个来自GenBank）构建的系统进化树表明PVY CP的成簇分布与株系类型(PVY^O、PVY^N、PVY^C、PVY^NTN)明显相关,同一株系的分离物成簇聚集在一起。通过世界分离物的PVY CP系统进化树,结合各分离物接种烟草后的发病症状及BLAST的比对结果,初步推测在41个中国分离物中,C组的分离物属于PVY^O株系,B组的分离物属于PVY^N株系,A组的分离物属于PVY^NTN株系。我国PVY的株系类型以PVY^N,PVY^O为主,而PVY^C少有分布。