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人乳铁蛋白(human lactoferrin)又称乳转铁蛋白,是人乳汁中主要的铁结合蛋白,广泛分布于多种组织、体液中,具有提高免疫力,抗菌抑菌,参与铁代谢等多种生物学功能,具有广泛的应用前景。从理论上说动物乳腺组织是表达人乳铁蛋白最为理想的器官。然而,人乳铁蛋白基因在动物乳腺中高效表达的报道较少。因此,如何提高人乳铁蛋白基因在动物乳腺中的表达水平是这方面研究的关键。我们在以前实验研究的基础上,选用山羊β-酪蛋白启动子、外显子1、外显子2和内含子1共6.7kb大小的序列作为人乳铁蛋白乳腺特异性表达的调控序列。用PCR的方法从质粒载体上扩增出增强子DNA片段,通过xhol酶切PL18获得hLTF cDNA片段,共同构建了由Chickenβ-globin+山羊β-酪蛋白5`端+增强子+hLTF cDNA+山羊β-酪蛋白3`端组成的人乳铁蛋白基因乳腺特异表达载体pCL25。通过制备转基因小鼠验证所获得的乳腺特异性表达载体的表达特性。将构建的pCL25质粒用sal1与not1限制性内切酶消化,回收和纯化约18kb的表达载体部分,将回收的片段通过显微注射法导入小鼠受精卵原核,结果获得29只G0代小鼠,经PCR检测,其中1只小鼠整合有外源基因(2~#)。转基因小鼠与正常小鼠交配,出生小鼠经PCR筛选,获得F1代转基因小鼠4只(2公,2母),F2代转基因小鼠8只(母)。采用酶联免疫法(ELISA assay)和蛋白印迹(Western Blot)对原代转基因小鼠及其后代的乳汁进行目的蛋白的表达检测。ELISA检测结果表明在转基因小鼠G0和F1、F2代乳汁中人乳铁蛋白表达均为阳性,表达量约在6～8g/L。Western Blot结果表明,转基因小鼠的乳汁中所表达的目的蛋白的分子量大小约为60kDa,小于