碳纳米管对牛血清白蛋白吸附特性的研究

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碳纳米管具有体积小、比表面积大等独特的物理化学性质,能够吸附或偶联生物大分子或药物,并可穿透细胞膜,有效跨越生物屏障,发挥其作为载体的特性,在蛋白质、基因和药物传递方面具有广阔的应用前景。牛血清白蛋白(BSA)性质稳定,来源丰富,在临床医学和生化实验中应用广阔。本研究以BSA为模式蛋白,系统的研究了不同条件下,多壁碳纳米管(直径10~20 nm,长度10~30μm)对BSA的吸附特性,确定了碳纳米管吸附BSA的最适条件,及碳纳米管-蛋白复合物的稳定性;并比较了不同种类的碳纳米管吸附蛋白的性能,为碳纳米管作为蛋白载体在生物医学领域的应用研究提供参考依据。本研究主要分两个部分:1.多壁碳纳米管对BSA的吸附测定:首先对多壁碳纳米管进行不同时间的超声分散,运用BCA试剂盒测定不同浓度的多壁碳纳米管对BSA的吸附性能,改变不同的吸附试验条件,测定多壁碳纳米管对BSA的吸附性能,又进行了多壁碳纳米管吸附BSA后的稳定性研究,最后将多壁碳纳米管-蛋白偶联物与脾细胞孵育。结果显示,对多壁碳纳米管进行超声分散后,对BSA的吸附比未分散的多壁碳纳米管提高了 5倍,由5:1提高到1:1,利用超声分散再进行蛋白吸附,经统计学分析,可显著提高多壁碳纳米管的吸附能力。对改变溶液的pH、离子强度研究显示,随着pH的升高,BSA的吸附率呈上升的趋势,pH=7.4时蛋白吸附率最高。随着离子强度的升高,BSA的吸附率呈先上升后下降的趋势,0.01 mol/L的PBS溶液中蛋白吸附率最高。随后增大溶液体积,碳纳米管与BSA在不同比例下,当两者的浓度不变,蛋白吸附率随着溶液体积的增大而降低;碳纳米管与BSA在不同比例下,当两者的浓度降低,蛋白吸附率随着溶液体积的增大而提高。在溶液中添加阿拉伯树胶(GA),随着溶液pH的升高,蛋白吸附率呈下降的趋势;在溶液中添加十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),随着溶液pH的升高,蛋白吸附率呈上升的趋势。多壁碳纳米管与蛋白偶联物在60 d没有发生明显的解离现象,将多壁碳纳米管-蛋白偶联物与脾细胞孵育后,在24 h观察脾细胞形态特征没有发现明显的变化。2.不同种类碳纳米管对BSA的吸附测定:将直径不同、长度不同的碳纳米管超声1 h,与BSA按不同比例混合,在多管涡动混匀仪涡动2 h,运用BCA试剂盒测定BSA的吸附情况。结果显示:经统计学分析,单壁碳纳米管的吸附蛋白能力强于多壁碳纳米管的吸附蛋白能力,不同长度、不同直径的碳纳米管对蛋白的吸附有差异。单壁碳纳米管(直径1~2 nm,长度5~30μm)的吸附性能最高,吸附量964.0 μg/mg。多壁短碳纳米管(直径<8nm,长度0.5~2μm)的吸附性能最低,吸附量301.5 μg/mg。综上可知,超声分散后的碳纳米管可显著提高蛋白吸附能力,长度不同、直径不同的碳纳米管均表现出不同的蛋白吸附能力,为下一步更好地使用碳纳米管与蛋白的复合物发挥生物学功能提供了重要的基础数据。
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