来源于 Thermotoga Naphthophila RUK-10 的一种β-葡萄糖苷酶(Tnap0602)能够高效转化人参皂苷Rb1生成稀有人参皂苷Rd,本论文设计了一种将β-葡萄糖苷酶与碳水化合物结合模块(CBM)融合表达的方法,研究所得杂合酶的固定化方式,为本β-葡萄糖苷酶的应用奠定基础。本论文构建了能够表达融合蛋白0602-CBM2和0602-CBM3的两种工程菌,并对目的蛋白进行了纯化。将纯化后的蛋白分别与微晶纤维素、再生无定形纤维素和滤纸浆进行吸附结合反应,从而实现了β-葡萄糖苷酶的初步固定化,并进行了人参皂苷转化实验。结果表明,重组酶0602-CBM2的微晶纤维素最大结合量为2mg/ml,而0602-CBM3与微晶纤维素,再生无定形纤维素和滤纸浆没有结合。固定化酶0602-CBM2重复使用三次后,其酶活降低了50%,上述结果表明固定化设计的β-葡萄糖苷酶在固定化酶的重复使用性等方面需要进一步提高;在人参皂苷提取过程中加入所述杂合酶,HPLC检测图谱显示,相较不加酶的提取物在35分钟处明显多出一个产物峰。