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手足口病是一种常见的婴儿及儿童疾病,近几年流行于亚太地区,于2008年5月2日被列为丙类法定传染病。手足口病主要由肠道病毒71型(Human enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A16型(Coxsackie virus A16,CA16)两种病原体感染引起。CA16只引起自限性的手足口病且很少出现并发症,而EV71可以引起严重的神经系统并发症并可导致死亡。针对EV71的抗病毒药物或疫苗可以有效降低手足口病的发病率和死亡率,然而,目前并无此类药物和疫苗可用。在已研发的药物和疫苗中,灭活全病毒疫苗已完成了三期临床试验,它可以有效地保护婴幼儿。然而灭活疫苗可能会引起不良副反应,并且存在灭活不完全导致EV71病毒残留的危害。因此,研发更为安全有效的疫苗仍然极其重要。VLPs(virus-like particles,VLPs)由于缺失了病毒基因组RNA,不能在体内进行复制,并且减轻了不良副反应,因此可能成为潜在的安全疫苗。在效率方面,VLPs表面高度重复的抗原表位可以诱发强烈的体液免疫反应。Chung等人报道了杆状病毒系统表达的EV71 VLPs可以有效诱发体液免疫反应,并且可以通过被动免疫为新生小鼠提供一定的保护。然而,由于EV71 VLPs没有经过RNA衣壳化,与成熟病毒存在一定的差异,导致部分免疫原性的丧失。由于杆状病毒只能感染昆虫细胞,其蛋白表达后修饰异于哺乳动物,导致表达的EV71 VLPs结构上与空衣壳也存在一定的差距,免疫原性进一步丧失。因此,本研究的主要目的在于:第一,通过研究不同疫苗佐剂对杆状病毒表达的EV71 VLPs提供的免疫保护能力的影响,找出适合于EV71 VLPs疫苗的佐剂;第二,探索哺乳动物表达系统表达EV71 VLPs的可行性。本论文的第一部分,我们选择了 CpG(ODN 1826),Al(OH)3和Poly(I:C)作为不同佐剂,并研究了它们对EV71 VLPs免疫保护能力的影响。本研究发现:1、EV71 VLPs提供的保护能力存在剂量依赖性:600U与400U VLPs提供水平相当的保护能力,优于100U VLPs;2、CPG和Poly(I:C)的使用剂量分别为10μg和50μg时可以最有效的提高EV71 VLPs的免疫原性;3、CPG可以比A1(OH)3和Poly(I:C)更有效的提高疫苗的保护能力。因此,本研究指示CPG更适合作为EV71 VLPs的疫苗佐剂,为日后发展EV71 VLPs疫苗选择佐剂时提供参考。本文的第二部分,首次利用塞姆利克森林病毒表达系统(Semliki forest virus(SFV)expression system)成功表达了 EV71 VLPs。本研究利用P62糖蛋白(E2-E3)中内切蛋白酶切割位点附近三个氨基酸突变的辅助载体与复制载体共转染细胞成功获得了条件感染型重组SFV病毒(recombinant SFV,rSFV),并进一步对rSFV的生产条件做了优化,最后通过rSFV感染细胞成功在BHK-21细胞内表达了 EV71 VLPs。总之,本论文证明了 CPG是一种更理想的EV71 VLPs佐剂,同时利用塞姆利克森林病毒表达系统成功表达了 EV71 VLPs。这些研究结果对日后EV71 VLPs疫苗的发展具有重要意义。