目的：探讨全身放疗（Total body irradiation TBI）对黑色素瘤荷瘤小鼠肿瘤微环境中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)和TGF-β1表达水平的影响，观察全身放疗对肿瘤免疫抑制微环境产生的影响；为干扰肿瘤微环境基础上细胞免疫治疗的临床应用提供新的理论依据和实验数据。方法:通过给C57BL/6J小鼠背部皮下接种黑色素瘤B16瘤细胞制备黑色素瘤荷瘤鼠模型。以8只正常小鼠作为健康对照组，其余进行造模，造模成功后，随机分成8组，每组8只。其中1组作为肿瘤对照组，其余7组给予Co60全身照射7Gy剂量，分别在照射后的第1、3、5、7、9、11、13天取小鼠的脾脏、血清、肿瘤组织进行检测，采用流式细胞技术检测观察照射前后小鼠脾脏中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及其变化；用ELISA法检测观察照射前后血清中TGF-β1含量及其变化；用Real-Time PCR方法检测观察照射前后肿瘤组织中TGF-β1mRNA的相对表达水平及其变化。结果：1.流式细胞技术检测各组小鼠脾脏CD4~+CD25~+FOXP3~+/CD4~+比例的变化，经统计分析结果显示：①肿瘤对照组中CD4~+CD25~+FOXP3~+/CD4~+比例（15.57±0.36%）明显高于健康对照组（3.47±0.17%）（P<0.05）。②荷瘤小鼠给予全身照射（TBI）后，CD4~+CD25~+FOXP3~+/CD4~+比例随着时间的延长，出现逐渐降低，维持一段时间后有升高的的趋势，至照射后9d（3.70±0.20%）明显低于荷瘤对照组（15.57±0.36%）（P<0.05）。其中第5d（4.25±0.20%）、7d（4.00±0.19%）、9d（3.70±0.20%），CD4~+CD25~+FOXP3~+/CD4~+的比例与健康对照组（3.47±0.17%）相比无明显差异（P>0.05）。③荷瘤小鼠TBI后对第5d（4.25±0.20%）、7d（4.00±0.19%）、9d（3.70±0.20%），CD4~+CD25~+FOXP3~+/CD4~+的比例进行比较后显示无统计学差异（P>0.05），均处于低水平，其中第9d的CD4~+CD25~+FOXP3~+/CD4~+的比例显示出最低值。2.使用ELISA法检测各组小鼠血清TGF-β1含量变化。结果显示：①在荷瘤对照组中血清TGF-β1含量（139.78±2.55ng/ml）明显高于健康对照组（63.60±2.12ng/ml）（P<0.05）。②荷瘤小鼠给予全身照射（TBI）后，血清TGF-β1含量伴随着时间的变化，出现逐渐降低的趋势，并在低水平持续一段时间，至照射后11d（18.15±0.39ng/ml）明显低于荷瘤对照组（139.78±2.55ng/ml）（P<0.05）。③荷瘤小鼠TBI后血清TGF-β1含量均明显低于荷瘤未照射组（P<0.05）。④荷瘤小鼠TBI后血清TGF-β1含量于第5d（38.15±1.10ng/ml）、7d（35.43±1.61ng/ml）进行比较后显示无统计学差异（P>0.05）。⑤荷瘤小鼠TBI后血清TGF-β1含量于第9d（19.09±0.58ng/ml）、11d（18.15±0.39ng/ml）、13d（18.65±0.36ng/ml）进行两两比较后无统计学差异（P>0.05），且均处于低含量水平，其中第11d血清TGF-β1含量显示出最低值。3.用Real-Time PCR法检测各组小鼠肿瘤组织中的TGF-β1mRNA相对表达水平变化。结果显示：①以荷瘤对照组小鼠肿瘤组织中的TGF-β1mRNA表达水平作为对照，各组荷瘤小鼠TBI后肿瘤组织中的TGF-β1mRNA相对表达水平均低于荷瘤对照组（1.000）（P<0.05）。②荷瘤小鼠给予全身照射（TBI）后，肿瘤组织中的TGF-β1mRNA表达水平随着时间出现逐渐降低的趋势，至照射后11d（0.203±0.035）明显低于荷瘤对照组（1.000）（P<0.05）。③荷瘤小鼠TBI后第1d（0.708±0.064）和第3d（0.651±0.059）肿瘤组织中的TGF-β1mRNA表达水平进行比较后无统计学差异（P>0.05）。④荷瘤小鼠TBI后第7d（3.44±0.026）、9d（0.234±0.043）、11d（0.203±0.035）、13d（0.254±0.019）进行两两比较后无统计学差异（P>0.05），均处于低表达水平，其中第11d肿瘤组织中的TGF-β1mRNA相对表达水平最低。4．试验过程中各组小鼠TBI后未出现死亡例数。结论：1.黑色素瘤荷瘤小鼠脾脏中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的比例及血清中的TGF-β1的表达水平明显高于健康小鼠，提示荷瘤小鼠肿瘤微环境中存在着免疫抑制因素，与以往的研究结果是相符的。2.全身放疗的方法可以有效地干扰黑色素肿瘤荷瘤小鼠体内的肿瘤微环境，给予全身7Gy的照射剂量后小鼠未出现死亡例数，能够明显降低体内CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的比例，有效地降低血清及肿瘤组织中的TGF-β1的表达水平。3.使用流式细胞技术能够较准确的反应脾脏中Treg水平，本实验显示出在全身放疗的第1天肿瘤小鼠Treg比例就开始降低，第5天至第9天维持在低水平，且与健康小鼠体内Treg水平无明显差异，第11天开始升高。既能打破肿瘤的免疫抑制微环境，又能不至于使Treg水平过低，引起自身免疫反应。同时也为细胞过继免疫治疗提供了细胞回输的最佳时间。4.用ELISA法检测血清中TGF-β1的含量，同时用Real-Time PCR法检测肿瘤组织中TGF-β1mRNA的相对表达水平，分别从蛋白水平和基因水平揭示了TGF-β1的表达水平变化趋势，本实验两种方法的结果显示出该变化趋势的一致性，以全身放疗的第11天TGF-β1的表达水平最低，并能持续5天左右，既能有效地干扰肿瘤微环境，又能为细胞过继免疫治疗回输的活化杀伤细胞提供充分的作用时间。