鸭MEF2家族的克隆及组织表达研究

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肌细胞增强子因子2(Myocyte enhancer factor 2,MEF2)属于MADS—box转录调节因子家族。MEF2广泛存在于心肌、骨骼肌和平滑肌等肌细胞中,可以激活多种与肌肉组织的分化、维持和再生密切相关重要基因的表达,目前MEF2的结合位点几乎在所有肌肉调控因子中被确认。本研究以其他物种MEF2基因序列为基础,克隆鸭MEF2家族4个成员的编码区序列;采用荧光定量PCR方法研究鸭自胚胎期10d至出壳1W,MEF2家族在肌肉组织中的发育性表达情况和表达模式差异。主要研究结果如下:获得的鸭MEF2A、MEF2B和MEF2C序列均为完整编码区(ORF)序列,长度分别为1147bp、368bp和1080bp,分别编码492、121和359个氨基酸;MEF2D只包括起始密码子ATG,无终止密码子TAA,长度为900bp的序列编码300个氨基酸。鸭MEF2A、MEF2C和MEF2D均具有MADS-Box和MEF2家族保守域结构特征,MEF2B含NEP家族的保守区域结构特征。荧光定量PCR研究发现,鸭MEF2家族成员的MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D在所研究的鸭胚胎期10d至出生后1W的时间段内,在胸肌、腿肌和心脏3种肌肉组织中均有不同程度的表达。在胸肌中,MEF2A的表达量自胚胎期10d至18d随时间增加表现为上调,胚胎期18d达到最高值后至出壳1W表现为下调,出壳后1W达到最低;MEF2B的表达自胚胎期10d至22d表现为下调,22d达到最低后又表现为上调,出壳1W达到最高表达量;MEF2C的表达量随时间变化趋势与MEF2A类似,只是最高表达量出现在胚胎期22d;MEF2D的表达量自胚胎期10d至27d随时间的变化趋势先表现为上调,胚胎期18d到达最高表达值后又表现为下调,胚胎期27d到出壳1W又表现出上调,10d表达量最低。在腿肌中,MEF2A的表达量随时间的变化趋势与其在胸肌中一致;MEF2B的表达量自胚胎期10d至14d表现上调,14d至22d又表现下调,之后胚胎期22d至出壳1W又开始上调,其中18d表达量最低,出壳1W最高;MEF2C的表达量胚胎期10d至14d表现上调,14d至22d表现为下调,22d至27d又表现为上调,胚胎期27d至出壳1W又表现为下调,其中胚胎期14d表达量最高,出壳1W最低;MEF2D的表达量在胚胎期10d至27d随时间的变化趋势先表现为上调,18d到达最高表达值后有表现为下调,27d到出壳1W又表现出上调,其中18d表达量最高,10d最低。在心肌中,MEF2A表达量随时间增加无明显的变化趋势;MEF2B表达量自胚胎期10d至18d表现为下调,18d达到最低表达量后至出壳1W又开始表现为上调,出壳1W表达量最高;MEF2C的表达量自1胚胎期0d至22d表现为下调,22d达到最低表达量后至27d表现为上调,胚胎期27d达到最高表达量后至出壳1W又表现为下调;MEF2D的表达量在胚胎期10d至18d随时间的增加先表现为下调,18d达到最低表达量后至27d表现为上调,27d达到最高表达量后,至出壳1W又表现为下调。MEF2家族各成员在鸭胸肌和腿肌之间表达差异较小,在骨骼肌与心脏中的表达差异较大。
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