【摘 要】
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笃斯越桔(Vaccinium ulinosum Linn.)属杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vacc inium)的多年生落叶灌木。笃斯越桔具有较高的经济价值和营养保健价值,近些年因它果实的口感好、味道甜,逐渐受到大众的欢迎。栽培蓝莓的果实大、品质好,但是人工栽培的蓝莓存在抗寒性差的问题,在寒冷的北方栽培冬季需要埋土防寒,给人工管理上带来了很大的难度。将栽培蓝莓和笃斯越桔进行原生质体融合有
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笃斯越桔(Vaccinium ulinosum Linn.)属杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vacc inium)的多年生落叶灌木。笃斯越桔具有较高的经济价值和营养保健价值,近些年因它果实的口感好、味道甜,逐渐受到大众的欢迎。栽培蓝莓的果实大、品质好,但是人工栽培的蓝莓存在抗寒性差的问题,在寒冷的北方栽培冬季需要埋土防寒,给人工管理上带来了很大的难度。将栽培蓝莓和笃斯越桔进行原生质体融合有望获得抗寒优质蓝莓新种质。分离出高活力高产量的原生质体,是体细胞融合培养的前提,本研究主要以笃斯越桔的离体叶片及培养愈伤组织制备的细胞悬浮液为材料,进行了原生质体的制备、分离与纯化,选出最佳的制备方法,建立完善的原生质体分离体系。在条件适宜的情况下,通过对比在不同酶液组合、酶液浓度、酶解时间、渗透压、pH值等重要因素下制备的原生质体的活力与产量值,筛选出制备原生质体最佳分离条件及原生质体最佳的纯化条件。研究结果如下:1、对笃斯越桔的两种材料的原生质体分离条件进行优化的过程中,经多次试验对比,确定酶液组合为0.8%纤维素酶、0.6%果胶酶,最佳渗透压浓度为0.60mol·L-1甘露醇,笃斯越桔离体叶片获得原生质体的产量最高为12.84×106个·g FW-1,因原生质体在渗透压合适的环境下被分离出来,所以活力较高,活力为73.6%。由笃斯越桔愈伤组织悬浮培养的细胞,在同等条件下分离的原生质体的效果不比离体叶片的效果好。2、在最佳酶液组合下,酶解液pH值为5.6,温度为(25±1)℃,黑暗条件下,以40r· min-1速度的恒温摇床上,酶解6h,酶解液的作用发挥到最大,产量与活力值达到最佳。3、在笃斯越桔原生质体的纯化过程中,离心速度为400r·min-1,离心时间4min时,为原生质体纯化的最佳条件,获得的原生质体产量与活力达到最高。
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