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目的:
1)研究D-GalN与LPS致小鼠急性肝损伤死亡的机制和对应的治疗策略。
2)研究RNF148，TSPAN15在D-GalN与CpG诱导小鼠急性肝损伤模型中的功能。
方法:
1)使用单克隆抗体中和HMGB1及TNFα，研究其在细胞因子级联反应中对其他促炎症因子的介导作用。
2)使用抑制剂及siRNA研究一氧化氮在肝损伤模型中致死小鼠的效应机制。
3)通过比较不同浓度的HMGB1抗体与TNFα抗体给药或不同延迟时间的抗体给药对小鼠在肝损伤致死模型中的生存率变化研究两种抗体的协同效应。
4)通过过表达RNF148或RNF148RING结构域突变体研究其在TLR9信号通路的功能。
5)通过敲低TSPAN15研究其在TLR9信号通路的功能。
结果:
1)在D-GalN与LPS诱导的肝损伤模型中，HMGB1介导TNFα，IL-6，组织因子和诱导型一氧化氮合成酶的产生。
2)在D-GalN与LPS诱导的肝损伤模型中，TNFα介导组织因子及诱导型一氧化氮合成酶的产生。
3)一氧化氮造成肝损伤小鼠出现凝血功能障碍和内出血死亡。
4)联合使用HMGB1抗体和TNFα抗体，给入D-GalN和LPS的同时给入250ng/kg体重的每种抗体即可达到接近100％的保护效果;或者使用25μg/kg体重的两种抗体，延迟3小时给入，亦可达到接近100％的保护效果。
5)过表达RNF148可使小鼠在D-GalN与CpG刺激下存活，而过表达RNF148RING结构域突变体没有此效果，且过表达RNF148能在体外实验降低CpG诱导的IFNα。
6)敲低TSPAN15在体外实验降低CpG诱导的IFNα，在体内实验降低D-GalN和CpG诱导的TNFα和IL-6。
结论:
在D-GalN+LPS产生的急性肝损伤致死过程中，我们描绘了一幅以HMGB1为核心调控介质，以一氧化氮为主要效应分子的机制图。在D-GalN+LPS给入后很短时间内，出现组织损伤和细胞坏死，HMGB1释放，HMGB1首先介导产生TNFα，IL-6，组织因子等作为级联反应的早期因子，随后与TNFα一起在稍晚些时候介导iNOS的表达并产生一氧化氮;一氧化氮能够提高肝脏毛细血管通透性，造成血浆渗漏，并致凝血功能异常，使得小鼠出现严重的内出血致死。针对一氧化氮的调控介导者HMGB1和TNFα，联合使用两者的中和性抗体，能够达到很好的治疗效果。此外，我们证实了RNF148与TSPAN15在调控TLR9的信号传导上有重要作用。