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中药内生菌能产生大量的结构新颖,活性优异的次生代谢产物,而且有些中药内生菌能产生与宿主植物相同或相近的代谢产物。由此,中药内生菌已成为中药化学研究的热点。羌活为我国中药常用品种,具有解表散寒,祛风除湿,止痛的功效。为了寻找结构新颖、活性优异的次生代谢产物,我们对羌活内生菌的化学成分进行研究。课题研究内容主要分为两部分,第一部分为一株羌活内生菌Myrothecium verrucaria的正丁醇部分次生代谢产物化学成分研究,第二部分为一株羌活内生菌Aspergillus fumigatus经表观修饰后次生代谢产物的化学成分研究。从新鲜羌活Notopterygium inchum Ting ex H.T.Chang的根中分离得到一株内生真菌Myrothecium verrucaria。课题组前期从Myrothecium verrucaria代谢产物乙酸乙酯提取物分离得到14个化合物。本文进一步对Myrothecium verrucaria代谢产物的正丁醇提取物进行化学成分研究,从中分离并鉴定了14个化合物,分别为:1环(脯氨酸-苯丙氨酸)(cyclo-(Pro-Phe))、2环(4-OH-脯氨酸-苯丙氨酸)(cyclo-(4-OH-Pro-Phe))、3环(4-OH-脯氨酸-亮氨酸)(cyclo-(4-OH-Pro-Leu))、4环(脯氨酸-丙氨酸)(cyclo-(Pro-Ala))、5环(脯氨酸-亮氨酸)(cyclo-(Pro-Leu))、6环(脯氨酸-甘氨酸)(cyclo-(Pro-Gly))、7环(苯丙氨酸-甘氨酸)(cyclo-(Phe-Gly))、8环(亮氨酸-亮氨酸)(cyclo-(Leu-Leu))、化合物9 N-乙酰色胺(N-acetyl tryptamine)、10 N-苯乙基乙酰胺(N-phenylethyl-acetamide)、11 N-(2-羟基苯乙基)乙酰胺(N-(2-hydroxyphenethyl)acetamide)、12 N-(4-羟基苯乙基)乙酰胺(N-(4-hydroxyphenethyl)acetamide)、13尿嘧啶(uracil)、14胸腺嘧啶(thymine)。化合物1~14均为首次从Myrothecium verrucaria真菌中分离得到。中药内生菌携带的能产生次生代谢产物的基因非常丰富。而在常规实验室培养条件下,许多基因处于沉默状态,或表达水平很低。为了刺激内生真菌沉默基因的表达,寻找新型的生物活性成分,我们采用在培养基中添加表观遗传修饰剂5-氮杂胞苷(5-AC)和伏立诺他(SAHA)的策略,并对乙酸乙酯提取物进行HPLC化学成分分析。最终选择了一株羌活内生菌Aspergillus fumigatus,并通过在培养基中加入SAHA的培养方式,对其代谢产物的乙酸乙酯提取物进行化学成分研究,最终分离并鉴定了8个化合物,为:1 5a,6-脱氢-3-脱羟甲基二硫代-3,10a-双(甲硫基)胶霉毒素(5a,6-dehydro-3-dehydroxymethylbisdethio-3,10a-bis(methylthio)gliotoxin)、2双硫双-(甲硫基)胶霉毒素(bis(dethio)bis-(methylthio)gliotoxin)、3胶霉毒素(gliotoxin)、4疣孢青霉原(verruculogen)、5 12,13-二羟基烟曲霉毒素C(12,13-dihydroxyfumitremorgin C)、6乙酰苯胺(acetanilide)、7 AM6898A、8 pseurotin A。其中化合物1为首次分离得到的天然产物,化合物6、7为首次从Aspergillus fumigatus中分离得到。