【摘 要】
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目的1、以人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y为研究对象,利用γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制细胞Notch信号通路,观察其对SH-SY5Y细胞增殖的影响。2、研究γ-分泌酶抑制剂DAPT对SH-SY5Y细
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目的1、以人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y为研究对象,利用γ-分泌酶抑制剂DAPT抑制细胞Notch信号通路,观察其对SH-SY5Y细胞增殖的影响。2、研究γ-分泌酶抑制剂DAPT对SH-SY5Y细胞Notch信号通路节点分子Notch1和Hes1表达的影响3、探究在SH-SY5Y细胞中Notch信号通路与核因子NF-kB信号通路存在的相互联系及其可能机制。方法以不同浓度DAPT对SH-SY5Y细胞处理后,MTT增殖实验比较各处理组细胞增殖情况,得出最佳药物作用浓度及最佳作用时间;以此药物浓度和作用时间处理细胞,并以RT-PCR、Western blotting技术检测与细胞增殖相关的部分基因表达变化情况。结果1、DAPT可抑制SH-SY5Y细胞的增殖,且作用具有浓度和时间依赖性。2、5μM DAPT可有效阻断SH-SY5Y细胞Notch信号通路,药物处理48小时后,NICD,Hes1表达减少,且NF-kB组分之一p65及其下游与细胞增殖有关靶基因Cyclin D1,Bcl-2表达亦有明显的减少。结论1、DAPT可有效阻断Notch信号通路的传导,抑制人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞的增殖。2、在SH-SY5Y细胞,Notch信号被阻断后,可引起NF-kB家族最常见成员之一p65表达减少,且使其下游靶基因Cyclin D1、Bcl-2表达减少,表明Notch信号通路与核因子NF-kB通路之间存在联系。
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