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背景及目的生殖道沙眼衣原体(C.trachomatis,CT)感染是最常见的性传播疾病之一。CT是一种严格细胞内寄生的病原体,而细胞自噬是常见的细胞抵抗病原体感染的机制之一。既往研究显示不同类型衣原体感染巨噬细胞或非吞噬细胞引起细胞自噬的作用不同,而生殖道CT(D-K型)易感人生殖道上皮细胞,其感染与细胞自噬的研究尚不明确,本文旨在探索CT感染人宫颈癌上皮细胞(Hela细胞)后引起细胞自噬的特性,为其深入研究奠定基础。材料与方法1.培养Hela细胞,用mRFP-GFP-LC3慢病毒进行感染从而构建双荧光Hela细胞,随后进行CT感染,置于活细胞工作站中连续培养及拍摄荧光。2.用沙眼衣原体D型感染普通Hela细胞,未感染的细胞作为对照,分别于感染的早期(6h)、中期(12h)、晚期(24-48h)处理细胞。通过蛋白电泳检测自噬蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ及p62,免疫荧光染色观察CT生长及细胞内LC3自噬小体、Lamp2溶酶体的情况。3.数据处理:利用Image J软件计算免疫印迹蛋白灰度值及测量免疫荧光染色的荧光强度。通过SPSS 20.0统计软件比较差异,Prism GraphPad 8.0作图。结果1.成功构建了沙眼衣原体D型的感染模型及mRFP-GFP-LC3双荧光Hela细胞。2.CT感染早、中期(6、12小时)与对照组相比LC3B Ⅱ/Ⅰ、p62水平无明显差异,免疫荧光和双荧光Hela细胞结果也显示两组细胞内自噬小体无显著差异。但组内细胞感染CT的情况存在差异,高自噬(胞内LC3高于均值)的细胞感染CT的平均个数为4.83个,低自噬(胞内LC3低于均值)的细胞平均感染CT为8.23个,且有显著差异(t-test,p<0.05)。单个细胞的LC3水平与该细胞感染CT的数量呈负性相关(r=-0.3342,p<0.01)。用自噬药物预先处理细胞后感染CT,结果为:对照组(DMSO)感染率66.8%,Rapamycin组57.8%,BafA1 组 72.2%,One-way ANOVA 分析,p<0.05。3.晚期(24、48小时)CT感染组自噬蛋白LC3 Ⅱ/Ⅰ高于对照组,免疫荧光和双荧光Hela细胞结果也显示CT组自噬小体增加(t-test,p<0.05)。免疫共定位结果显示CT感染晚期,细胞内LC3自噬体与溶酶体蛋白Lamp2共定位细胞比例减少(t-test,p<0.05)。结论1.感染的早、中期,CT不会引起宿主细胞总体自噬增加,但不同细胞感染情况及自噬水平存在差异。自噬水平较高的细胞,其感染CT的个数显著少于低自噬的细胞,细胞内LC3自噬小体的多少与胞内CT数量呈负相关。2.感染晚期,Hela细胞自噬增加,但CT生长可能抑制自噬溶酶体形成。