论文部分内容阅读
目的: 通过分析银屑病组与健康对照组外周血调节性T细胞(regulatory T cells,Tr细胞)数量及雷公藤甲素(Triptolide,Tri)对其的影响,以及Tri与环孢菌素A(Cyclosporin A,CsA)对多克隆刺激剂体外活化T细胞CD69表达及细胞周期影响的比较性研究,探讨Tri治疗银屑病的作用机制,以期为Tri的临床应用提供更深入的理论依据。 方法: 分别取银屑病组和健康对照组肝素抗凝静脉血,新鲜血标本或加Tri体外全血培养72h后三色免疫荧光标记测定Tr细胞;Tri或CsA与外周血预孵30min后,加入多克隆刺激剂PDB+Ionomycin(Ion)或PHA培养,分别于4h、24h和72h收获细胞。培养4h和24h收获的细胞用抗CD3和抗CD69单抗进行双色免疫荧光标记,以检测T细胞的活化;培养72h收获的细胞以抗CD3单抗标记并裂解红细胞,再以PI染色分析Tri与CsA对T细胞细胞周期的影响及Tri对T细胞的细胞毒性。全部样品以流式细胞仪进行检测和分析。 结果: 1 银屑病患者外周血Tr细胞的数量:银屑病组新鲜外周血CD4~+CD25~+T细胞和CD8~+CD28~-T细胞占总T细胞的百分率分别为2.30±0.35和38.85±1.89,均显著低于健康对照组(百分率分别为5.67±0.44和53.30±2.01,P<0.01)。银屑病患者及健康对照以Tri(1ug/mL)处理72h组,外周血CD4~+CD25~+T细胞占T细暨南大学颀士学位论文(2003)雷公藤甲素对银屑病思者外周血 T细胞活性的影响胞的百分率分别为2.18士0.32和5.58士0.45,未处理组的百分率分别为2.ZI士0.41和 5.64士 0.56(P>0.05),而两者以 Ti处理 72h组外周血 CDS”CD28”T细胞占 T细胞的百分率分别为 37.95士 1.42和 sl.75土 1.08,与两者未处理组(百分率分别为38.34士l.75和52.20士l.56,P>0.05)差别无统计学意义。 2 h对多克隆刺激剂体外活化银屑病患者外周血T细胞CD69表达的影响:Ti能够显著下调 PDBqon活化 T细胞 CD69的表达率,当 Ti的浓度从 sng/InL、40n狙、20()up升高至luglmL时,PDB刊on活化4h银屑病组T细胞CD69表达百分率依次为 gi.88士2.14、72.gi士2.65、35.34士l.50和 11.08士l.78,而健康对照组分别为 93.78土l.12、73.10士l.sl、36.40士l.32和 10.32土卜M(P>(.05)。在相同浓度梯度Ti的作用下,PHA活化24h银屑病T细胞CD69表达的百分率分别为57.59土l.56、30.06士l.41、9.sl士l.12及6.35上l.04,健康对照组则分别为58.72土l.89、31.27士l.16、10.19士0.93及 6.65士l.13(P>0.05)。且 Ti对处于静息状态的T细胞CD69的表达无抑制效应,此外,CsA对两组不同刺激剂体外活化T细胞CD69的表达均无影响。 3Th对多克隆刺激剂体外活化银屑病患者外周血T细胞细胞周期的影响:经PDB+Ion刺激后,银屑病组与健康对照组分别有 18.11%和 18.30%的外周血 T细胞进入S+G。IM期,而Ti及CsA能够呈剂量依赖性阻止多克隆刺激剂活化T细胞的增殖,但抑制效应未显示细胞周期特异性。细胞活性分析显示Tri对T细胞无明显细胞毒作用。结论: 银屑病患者存在调节性T细胞数量的下降;本实验浓度范围内的Ti对多克隆刺激剂体外活化T细胞CD69的表达有明显抑制作用,并能明显阻止多克隆刺激剂体外活化的T细胞进入S期和GZfM期。这些结果提示Ti可能通过干扰早期活化信号转导通路而抑制T细胞的活化和增殖,这可能是其治疗银屑病的细胞免疫学基础。本研究结果对雷公藤甲素及以其为主要活性成分的雷公藤制剂在银屑病的临床应用上具有一定的指导意义。