基于二硫化钼量子点的荧光生物传感器的构建及应用研究

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荧光分析方法由于其快速的响应,简单的操作,较高的灵敏度和选择性而在分析传感中具有广泛的应用,荧光化学传感器已广泛用于各种生物分子的检测。荧光探针是构建荧光传感器的重要组成部分,作为一种优良的荧光纳米探针,二硫化钼量子点由于其独特的光学性能,良好的生物相容性及水溶性已经被用于构建一系列荧光纳米传感器。除此之外,与单荧光检测体系相比,比率荧光检测体系通过测量两个发射波长下的荧光强度的比值可以有效减少不可控制的外部因素的干扰,从而提高分析结果的准确度和灵敏度。本论文主要通过二硫化钼量子点作为荧光探针利用比率荧光策略构建高灵敏的荧光生物传感器,并将其用于各种生物分子的检测。在第1章中,我们主要介绍了二硫化钼量子点的合成方法、光学性质及其在生物医学领域中的应用。最后,总结了本论文的主要研究内容及意义。在第2章中,我们基于二硫化钼量子点和辣根过氧化物酶建立了一种比率荧光方法来测定抗癌药物6-巯基嘌呤。当没有6-巯基嘌呤存在时,辣根过氧化物酶会催化过氧化氢氧化邻苯二胺形成有荧光的2,3-二氨基吩嗪,导致二硫化钼量子点位于415 nm处的荧光猝灭,而2,3-二氨基吩嗪位于560 nm处的荧光增强。然而,当有6-巯基嘌呤存在时,它会被过氧化氢氧化形成二硫化二聚体,这样只有较少的过氧化氢用于邻苯二胺的氧化,因而形成较少的2,3-二氨基吩嗪,导致415 nm处的荧光恢复而560 nm处的荧光减弱。因此可利用两处荧光强度比值的变化来灵敏地检测6-巯基嘌呤。在最佳的实验条件下,我们得到了过氧化氢浓度为0.5-140μM和6-巯基嘌呤浓度为0.5-70μM的线性检测范围,且检测限分别为0.1μM和0.29μM。该方法被成功地应用于人尿液样品中6-巯基嘌呤的检测,结果令人满意。在第3章中,我们基于二硫化钼量子点和2,3-二氨基吩嗪建立了一种用于pH传感和尿素检测的比率荧光检测体系。将对pH敏感的2,3-二氨基吩嗪作为荧光指示信号,而对pH不敏感的二硫化钼量子点用作荧光参比信号。随着pH值从3.0到9.0不断增加,2,3-二氨基吩嗪在568 nm处的荧光强度会逐渐增加,而二硫化钼量子点位于420 nm处的荧光强度保持不变。因此,通过测量568 nm和420 nm处荧光强度的比值可以用来灵敏地监测pH的变化。pH传感体系对3.8-6.0范围内的pH值具有线性且可逆的响应,且监测间隔为0.2 pH个单位。此外,在尿素酶的存在下,会发生尿素的酶促反应并导致溶液的pH升高,因此可通过使用上述pH传感体系来实现对尿素的检测。比率荧光强度与5-700μM范围内的尿素浓度之间具有良好的线性关系,检测限为1.8μM。所建立的比率荧光方法具有高的灵敏性和选择性,并且被成功地应用于水样中尿素的检测。在第4章中,我们基于二硫化钼量子点与肾上腺素在聚乙烯亚胺水溶液中的荧光性氧化聚合产物(PEP-PEI)之间的荧光共振能量转移作用建立了一种能灵敏检测肾上腺素和抗坏血酸的比率荧光方法。PEP-PEI的不断形成会导致二硫化钼量子点位于414 nm处的荧光猝灭,而PEP-PEI位于522 nm处的荧光逐渐增加。由于抗坏血酸的强还原性,抗坏血酸的引入可以抑制肾上腺素的氧化聚合,导致二硫化钼量子点在414 nm处的荧光恢复,同时PEP-PEI在522 nm处的荧光下降。因此,可以通过测量522 nm和414 nm处的荧光强度的比值变化来准确灵敏地检测肾上腺素和抗坏血酸。获得肾上腺素的线性检测范围为0.2-40μM,检测限为0.05μM。抗坏血酸的线性检测范围为0.5-40μM,检测限为0.2μM。该方法被用于人尿液样品中肾上腺素的检测和人血清样品中抗坏血酸的检测,取得了令人满意的结果。
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