【摘 要】
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目的:本研究旨在探讨支链氨基酸（Branched-chain amino acid,BCAAs）代谢在非酒精性脂肪肝病（Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）发生过程中的作用,以及BCATc（Cytosolic branched chain aminotransferase,胞质支链氨基转移酶）抑制剂2对非酒精性脂肪肝病的治疗作用及其机制。方法:1、利用油酸
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目的:本研究旨在探讨支链氨基酸（Branched-chain amino acid,BCAAs）代谢在非酒精性脂肪肝病（Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）发生过程中的作用,以及BCATc（Cytosolic branched chain aminotransferase,胞质支链氨基转移酶）抑制剂2对非酒精性脂肪肝病的治疗作用及其机制。方法:1、利用油酸（Oleic acid,OA）建立非酒精性脂肪肝的细胞模型,通过油红O染色法检测BCAAs处理后LO2和Hep G2细胞脂滴形成结果,酶标仪法检测细胞中胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平。实验分组为对照组（Control）,OA处理组,OA+BCAAs处理组。2、为探索BCATc抑制剂2和BCAT-IN-2（Mitochondrial branched chain aminotransferase inhibitor,线粒体支链氨基转移酶抑制剂）对OA诱导的细胞脂肪变性影响。先利用MTT法检测LO2和Hep G2细胞的增殖活性,实验分组1为对照组（Control）,BCATc抑制剂2浓度梯度处理组,实验分组2为对照组（Control）,BCAT-IN-2浓度梯度处理组;利用油红-O染色法检测细胞脂滴形成结果,酶标仪法检测细胞TC、TG水平。3、为探索BCATc抑制剂2对OA诱导的细胞脂肪变性的调控机制,通过Western Blot检测LO2细胞胆固醇调节元件结合蛋白1（Sterol-regulatory element binding proteins 1,SREBP1）的表达水平,以及Q-PCR方法检测脂肪合成和分解相关基因的m RNA表达水平。4、为探讨BCAAs和BCATc抑制剂2对OA诱导的细胞凋亡的影响。在LO2细胞中设置两个实验分组,实验分组1为对照组（Control）,OA处理组,OA+BCAAs处理组。实验分组2对照组（Control）,OA处理组,OA+BCATc抑制剂2处理组。MTT法检测各组细胞增殖活性;通过流式仪检测细胞凋亡情况。5、为确定BCATc抑制剂2对OA诱导的线粒体功能损伤的保护作用,通过线粒体膜电位检测试剂JC-1检测细胞内线粒体膜电位水平,利用线粒体ROS检测试剂Mito SOX检测细胞内线粒体ROS水平。6、为进一步探讨BCATc抑制剂2对OA诱导的细胞凋亡的保护作用机制,用Western Blot法检测Bcl2/Bax/Caspase3等凋亡相关蛋白的表达水平。结果:1、BCAAs促进了油酸诱导LO2和Hep G2细胞的脂质积累,BCATc抑制剂2抑制了油酸诱导LO2和Hep G2细胞的脂质积累。2、BCATc抑制剂2抑制了油酸诱导的SREBP1和脂肪合成相关基因的表达。3、BCATc抑制剂2保护了油酸诱导的线粒体膜电位的破坏并减少了细胞ROS的产生。4、BCAAs促进了油酸诱导的细胞凋亡,BCATc抑制剂2减轻了油酸诱导的细胞凋亡。5、BCATc抑制剂2抑制了油酸诱导的细胞凋亡相关蛋白Bcl2/Bax/Caspase3的表达上调以及AKT/JNK信号通路的激活。结论:1、BCAAs可以促进油酸诱导的非酒精性脂肪肝体外模型的脂质合成和肝细胞凋亡,而BCATc抑制剂2则抑制油酸诱导的非酒精性脂肪肝体外模型的脂质合成和肝细胞凋亡。2、BCATc抑制剂2处理减弱了油酸诱导的非酒精性脂肪肝体外模型的细胞凋亡作用与AKT/JNK信号通路和Bcl2/Bax/Caspase3轴有关。
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