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研究目的:类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis,RA)是一个以累及周围关节为主的多系统炎症性自身免疫病。RA 的特征性症状为对称性、周围性、以及多个关节的慢性炎症病变。本病呈全球性分布,在我国的患病率为0.32%—0.36%,低于欧美国家白种人的1%,是造成我国人群丧失劳动力和致残的主要病因之一。RA病理变化为慢性滑膜炎,侵及下层的软骨和骨,造成关节的损伤,60-70%的病人在活动期血清中出现类风湿因子(rheumatoid factor, RF)。其中细胞因子和金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)在RA免疫炎症和骨质破坏中起着重要的作用,因此对于CK,MMPs以及组织金属蛋白酶抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)的研究一直是个热点问题。又因为诸多病理因素需要通过信号通路来发挥效应,越来越多的研究者开始关注与 RA 相关的信号通路。中药雷公藤是治疗 RA 的一种有效药物,已经在临床使用几十年,但是目前对于雷公藤在RA中的治疗机制尚不清楚。在本实验中,我们以佐剂性关节炎(adjuvent induced arthritis,AIA)大鼠和RA病人的滑膜细胞(Fibroblast-Like synoviacytes, FLS)作为病理模型,将从以下三个方面探讨雷公藤的作用机理:①雷公藤多甙对 AIA 大鼠的治疗作用及血清细胞因子影响的研究;②雷公藤多甙对AIA大鼠的血清MMPs/TIMPs平衡影响的研究;③雷公藤多甙对RA病人滑膜细胞的ERK磷酸化影响的研究。 实验方法:本实验主要分为三个部分,前两部分以 AIA 大鼠作为病理模型,第三部分实验以 RA 病人的滑膜细胞作为病理模型,探讨雷公藤多甙治疗RA 的作用机制。第一部分实验动物随机分为三组,即正常对照组,模型组和雷公藤治疗组。其中雷公藤治疗组以完全弗氏佐剂致炎后第18天,予以雷公藤多甙(每只每天20mg/kg,口服灌胃)治疗21天。观察记录大鼠的一般状况,不同时间点各组大鼠体重,原发侧和继发侧关节的肿胀度的变化,并绘制变化曲线。在治疗21天后,断头处死大鼠,取血清。分别用ELISA法测定AIA大鼠血清IL-4,IL-10,IFN-γ的含量;用Griese法测定AIA大鼠血清 NO 的含量;用胸腺细胞法测定 AIA 大鼠血清 IL-1 的含量。通过检测各类细胞因子含量的变化探讨雷公藤多甙对 AIA 的治疗作用机制;第二部分实验,采用明胶酶谱分析法检测AIA大鼠血清MMP-2 和MMP-9,采用反向明胶酶谱分析法检测TIMP-1和TIMP-2的含量与活性。通过检测相关MMPs 和TIMPs的变化,探讨雷公藤对AIA 中MMPs/TIMPs 之间平衡的影响;第三部分实验以 RA 病人的滑膜细胞作为病理模型,用western blotting 检测雷公藤多甙对IL-1诱导的RA病人滑膜细胞中ERK磷酸化的影响,从细胞膜信号传导途径探讨雷公藤多甙在RA中的作用机制。 实验结果:第一部分实验结果发现,雷公藤多甙(每只每天20mg/kg,口服灌胃)治疗AIA 大鼠21 天后,AIA 大鼠关节的原发侧肿胀和继发侧肿胀有明显的改善。在致炎 2 天后,(除正常组外)所有大鼠出现致炎局部(原发侧)的红肿,伴皮温升高,精神萎靡。致炎12天后,(除正常组外)所有大鼠在不同程度上出现对侧后肢继发性肿胀,少数(6 只)的前肢和尾根部及耳部有结节出现。致炎 18 天后,AIA 大鼠的关节肿胀程度较之急性期有所缓解,局部的红肿基本消失,皮温基本正常,但几乎都伴