第一部分Nlrp3通过p-Sik1/Srebf1/Aim2调控EAU的作用及机制研究目的:葡萄膜炎是一类严重威胁视力的眼部炎症性疾病,其治疗方法会导致严重的副作用。以往的研究表明,核苷酸结合结构域和富含亮氨酸的重复序列,含吡啶结构域3（Nlrp3）炎症小体参与了葡萄膜炎两种常见类型白塞氏病和Vogt小柳原田综合征（VKH）的过程,然而,其具体作用和潜在机制仍不明确。因此我们的研究目的在于探讨Nlrp3在葡萄膜炎动物模型实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中的作用和机制,为葡萄膜炎的治疗提供新的思路。方法:首先,我们将Nlrp3缺陷的小鼠进行EAU模型的诱导和疾病评分,观察Nlrp3在EAU中发挥的作用。然后通过蛋白印迹和免疫荧光等方法检测巨噬细胞活化的标记物和焦亡介质,评价Nlrp3对巨噬细胞活化和焦亡的影响。另外,通过转录组测序和免疫沉淀分析Nlrp3对巨噬细胞焦亡影响的潜在机制。最后,根据Nlrp3在EAU中发挥的作用,Nlrp3抑制剂或过表达可能为葡萄膜炎的治疗提供有效的方法。结果:与以前的研究相反,我们的结果表明Nlrp3在EAU中起抗炎作用。此外,巨噬细胞在Nlrp3-/-EAU小鼠中显示出增加的促炎型活化和细胞焦亡。进一步的研究表明,由于Nlrp3缺乏,黑色素瘤2缺失（Aim2）的转录上调介导了巨噬细胞的这种焦亡。在机制研究中,我们发现Nlrp3的缺乏导致磷酸化的盐诱导激酶1（p-Sik1）的下调以及随后固醇调节元件结合转录因子1（Srebf1）的表达上调,然后Srebf1与Aim2直接结合,促进Aim2的转录。最后,Aim2的沉默或缺陷,Srebf1的沉默和Nlrp3的过表达均导致EAU炎症减弱。结论:我们的结果显示,Nlrp3通过调节Srebf1的表达来抑制Aim2炎症小体介导的EAU炎症,突出了靶向Nlrp3的治疗潜力。第二部分METTL3在LPS诱导的RPE细胞炎症中的作用及机制研究目的:葡萄膜炎作为一类常见的致盲性眼病,其病因复杂且迫切需要更为安全的替代疗法。N6-甲基腺苷（m6A）RNA甲基化已被证实参与了多种生物学过程,但尚未揭示其在葡萄膜炎发展中的作用。我们的研究旨在探讨甲基转移酶样3（METTL3）在脂多糖（LPS）诱导的视网膜色素上皮细胞（RPE）炎症中的作用及其潜在机制,为葡萄膜炎的治疗提供新的靶点。方法:实时荧光定量聚合酶链反应（RT q PCR）和蛋白印迹法检测了经LPS刺激的人RPE（h RPE）细胞和ARPE19细胞系中METTL3的表达水平。METTL3沉默的h RPE和ARPE19细胞的增殖由细胞计数试剂盒8（CCK8）和5-溴-2’-脱氧尿嘧啶（Edu）检测。免疫印迹法和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测了紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达和炎症因子白细胞介素（IL）-1、6和8的分泌水平。转录组测序和甲基化转录组免疫沉淀测序用于分析METTL3下游靶基因核受体亚家族2组F成员1（NR2F1）;甲基化转录组免疫共沉淀联合定量聚合酶链式反应用于验证NR2F1的甲基化修饰位点。m RNA稳定性实验检测NR2F1的半衰期;染色质免疫共沉淀（Ch IP）联合聚合酶链式反应验证NR2F1与IL-6的直接结合。结果:我们的研究结果表明,h RPE和ARPE19细胞在LPS刺激后METTL3的蛋白表达均增加。此外,这两种类型的RPE细胞在METTL3沉默后均表现出增殖功能抑制,屏障功能减退和促炎因子分泌增强。从机制上讲,我们发现NR2F1作为被METTL3甲基化的靶基因,以m6A依赖性方式增强RPE细胞的炎症。有趣的是,NR2F1的沉默逆转了METTL3沉默的RPE细胞中增加的炎症。结论:我们的研究表明METTL3通过甲基化NR2F1来减轻LPS刺激的RPE细胞炎症,这证实了METTL3在RPE细胞中的重要作用。