水体钙镁离子对脊尾白虾变态发育的影响以及低盐碱适应性驯化研究

来源 :河南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:simon20088
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我国有9915万hm~2盐碱地,其中沿黄盐碱地有666.7万hm~2。沿黄盐碱地渔业长期以来以鱼类养殖为主,养殖模式单一,养殖密度过高,养殖病害日益严重,污染加剧,加之低盐碱生态适应性养殖品种缺乏,使沿黄水产养殖发展遇到了瓶颈。脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)是海水长臂虾科的代表种,肉质细嫩,风味鲜美,具有生长速度快、耐低盐等优点,可在水体盐度4-35水体中正常生长,通过逐级淡化可在纯淡水中生存,是内陆低盐碱水域可移植驯化的优良品种。本研究拟阐明河南地区沿黄盐碱水域水质特点,针对不同地域、不同水质特点研发脊尾白虾盐碱水域驯化技术,探究低盐碱条件、不同钙镁比例对脊尾白虾变态发育、抗氧化酶活力、渗透压调节相关酶及基因表达的影响,以期为脊尾白虾沿黄盐碱水域养殖提供理论依据与技术支持。主要研究结果如下:1、河南省沿黄盐碱水质特点调查与分析本章研究了河南沿黄郑州、新乡、开封、濮阳4个地区的井水和池塘水质特点,测定了了p H、盐度、硬度、Na+、K+离子含量等指标。结果表明,河南沿黄4个采集点水样p H值范围为6.96~9.07,盐度为0.5~2.73,硬度为4.36~22.34mmol/L,碱度为4.6~13.64mmol/L,碱度主要由HCO3-组成。阳离子以Ca2+、Mg2+和Na+为主,K+含量较低。2、不同盐度及钙镁比例对脊尾白虾幼体变态发育的影响本章研究了15、10、5盐度和5盐度下不同钙镁比例对脊尾白虾幼体的变态发育的影响。研究结果显示,幼体孵化后14天,15、10盐度组全部变为仔虾;在15天时,5盐度组全部变为仔虾。全部变为仔虾时15、10、5盐度组存活率分别为71.00%、74.00%、78.56%。在盐度5下,钙离子浓度为50 mg/L时,1:1.5、1:2.5组在第12天时全部变为仔虾,1:3组第13天时全部变为仔虾,1:1、1:2组第14天时全部变为仔虾。全部变为仔虾时1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3组存活率分别为18.75%、65.00%、56.25%、60.00%、67.50%;钙离子浓度为80 mg/L时,1:2.5组在第12天时全部变为仔虾,1:1.5、1:3组第13天时全部变为仔虾,1:1组第14天时全部变为仔虾。全部变为仔虾时1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3组存活率分别为28.09%、66.25%、58.75%、78.56%、63.33%。3、脊尾白虾仔虾低盐碱驯化技术研究本实验研究了脊尾白虾仔虾低盐碱驯化技术。首先按照10→7→5→3→2→1、10→5→3→2→1、5→2→1、5→1盐度梯度逐天降低盐度,盐度1水体中72h存活率为100%;然后按照2→4→5→6、2→6mmol/L碳酸盐碱度梯度逐天升高碱度,盐度1碱度6水体中72h存活率为100%。结果表明,脊尾白虾仔虾经过驯化可以在低盐碱水体中生存。4、不同钙离子浓度下钙镁比例对脊尾白虾幼虾生长及酶活性的影响本实验设置30、40、50mg/L 3个钙离子浓度组,每个浓度下分别设置1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3钙镁比例,在上述水体中进行脊尾白虾仔虾4周养殖。养殖结束后统计存活率和增重率,测定T-SOD、CAT、GSH-Px、T-AOC、AKP、ACP、Na+-K+-ATP、Ca2+-ATP酶的活性。结果显示,各实验组脊尾白虾幼虾存活率均在70.0%以上,增重率均高于397%。钙离子浓度30、40、50mg/L,T-SOD酶活性在钙镁比例1:2-1:2.5时活性最高。钙离子浓度30mg/L,CAT酶活性在钙镁比例为1:2时活性最高,40mg/L时,钙镁比例1:2.5时活性最高。钙离子浓度30mg/L时,钙镁比例1:3时GSH-Px活性最高,与1:2组无显著性差异(P>0.05);钙离子浓度40、50mg/L时,钙镁比例1:2时活性最高。钙离子浓度为30、50mg/L时,钙镁比例1:1.5时T-AOC活性最高;钙离子浓度40mg/L时,钙镁比例1:2时活性最高。钙离子浓度30mg/L时,钙镁比例1:1.5时ACP、AKP活性最高;钙离子浓度为40mg/L,钙镁比例为1:2时ACP、AKP活性最高;钙离子浓度50mg/L时,钙镁比例1:2.5时AKP活性最高,钙镁比例1:2时ACP活性最高。钙离子浓度30、40、50mg/L,Na+-K+-ATP酶活性在钙镁比例1:2时最低(P<0.05),Ca2+-ATP酶活性分别在钙镁比例为1:3、1:1.5、1.1时最高(P<0.05)。5、低盐度下碳酸盐碱度胁迫对脊尾白虾V-H+-ATPase、Na+-K+-ATPase表达的影响本实验通过RACE技术获得了脊尾白虾V-H+-ATPase基因,分析了其生物信息学。碳酸盐碱度胁迫后3、6、12、24、48、72h和8周,荧光定量检测鳃和肝胰腺中V-H+-ATPase、Na+-K+-ATPase的表达量。实验结果显示,脊尾白虾V-H+-ATPase基因c DNA全长2405bp,开放阅读框(ORF)1470bp,5’非编码区32bp,3’非编码区902bp,共编码489个氨基酸。氨基酸序列比对发现,脊尾白虾V-H+-ATPase在进化上与其他甲壳类动物一致性达95%以上,与凡纳滨对虾亲缘关系最近。脊尾白虾V-H+-ATPase基因在各组织中均有表达,其中在鳃中表达量最高,肝胰腺次之。碳酸盐碱度胁迫6、12、72h以及8周,胁迫组鳃V-H+-ATPase相对表达量显著高于对照组(P<0.05);胁迫72h时,胁迫组鳃Na+-K+-ATPase基因显著高于对照组(P<0.05),8周后无显著性差异(P>0.05)。胁迫3、6h和8周,胁迫组脊尾白虾肝胰腺V-H+-ATPase表达量显著高于对照组(P<0.05);胁迫3-72h,胁迫组脊尾白虾肝胰腺Na+-K+-ATPase表达量显著高于对照组(P<0.05),8周后与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。
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