【摘 要】
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β防御素是一种富含阳离子的小肽,在机体免疫调节中起到重要作用。本文旨在研究高度表达在附睾头部的g BD124基因沉默和过表达后对p38MAPK/AP1通路关键蛋白及其下游趋化因子和细胞因子表达的影响。本研究将用课题组已筛选出的有效沉默载体以及过表达载体转染山羊附睾头细胞,设置了空白对照、空载体组对照,用2μg·m L-1嘌呤霉素筛选后分别收集细胞和培养液,采用qRT-PCR、Western blo
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（No.31572407）；
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β防御素是一种富含阳离子的小肽,在机体免疫调节中起到重要作用。本文旨在研究高度表达在附睾头部的g BD124基因沉默和过表达后对p38MAPK/AP1通路关键蛋白及其下游趋化因子和细胞因子表达的影响。本研究将用课题组已筛选出的有效沉默载体以及过表达载体转染山羊附睾头细胞,设置了空白对照、空载体组对照,用2μg·m L-1嘌呤霉素筛选后分别收集细胞和培养液,采用qRT-PCR、Western blot和ELISA检测了g BD124、MAPK信号通路关键蛋白、细胞因子和趋化因子基因和蛋白表达情况。试验结果如下:1、LV10-gBD124-51与LV10-gBD124-161联合转染组和LV10-NC组的转染效率超过了80%,空白对照组无荧光。与NC对照组相比,g BD124沉默显著降低了山羊附睾头细胞MAPK通路中MAPK1、AP1两个亚型c-JUN和c-FOS基因表达（P<0.05）,增加了RASA1基因表达（P<0.05）;g BD124沉默显著降低了总p38MAPK、总c-JUN和总c-FOS蛋白表达,以及p38MAPK和c-JUN蛋白磷酸化（P<0.05）;g BD124沉默显著上调了MAPK通路下游IL-1β及其受体IL-1R2、IL-8和趋化因子CCL6和CCL21基因表达（P<0.05）,下调了CCL5和IL-1α基因表达（P<0.05）;g BD124沉默显著降低了细胞培养液中CCL5浓度（P<0.05）。与空白对照组相比,g BD124沉默显著增加培养液中IL-1β和IL-8,降低了IL-1α浓度（P<0.05）。2、LV5-gBD124-过表达组以及空载体对照组转染效率超过了80%,空白对照组无荧光。无论是从m RNA水平还是蛋白水平来看,过表达组的g BD124表达量都显著升高（P<0.05）。与LV5-NC组相比,gBD124过表达显著降低了TAB2、MAPK1、MAPK2、MAPK8IPHE、RASA1、RASGRP1基因的表达（P<0.05）;g BD124过表达显著升高了总p38MAPK和总c-FOS蛋白表达,以及p38MAPK蛋白磷酸化（P<0.05）;g BD124过表达显著提高了趋化因子CCL21和细胞因子受体IL-1R2基因的表达（P<0.05）,下调了趋化因子CCL5和CCL6的基因表达（P<0.05）;g BD124过表达显著增加了培养液中MAPK通路下游IL-1α的浓度（P<0.05）。结论:gBD124基因沉默通过抑制p38MAPK/AP1信号通路调控附睾头细胞趋化因子和细胞因子的表达;g BD124过表达通过上调p38MAPK/AP1信号通路活性相关基因和蛋白的表达调控附睾头细胞趋化因子和细胞因子的表达。
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