抗CD3单克隆抗体是一种重要的移植排斥反应抑制剂，可用来治疗急性排斥反应，同时还可用来治疗免疫力低下和恶性肿瘤，在临床应用上极具潜力。由于鼠源抗CD3单抗在临床应用中会引发HAMA反应和严重的“首剂”副作用，需要进行改造以降低其异源性。 抗CD3改型单链抗体（ReCD3）是国内首次报道的OKT3人源化抗体，通过将鼠源单抗OKT3的L链和H链的CDR区分别移植入人源抗体LS1和Nd的FR区构建而成。但由于构建改型抗体的同时往往带来亲和力的下降，需进一步进行改造。 本研究首先通过巨型引物PCR定点诱变方法对ReCD3基因片段进行定点突变。通过计算机分子模拟及同源序列的比较，设计两组简并引物，以ReCD3 DNA片段为模板扩增出两条引入定点诱变的DNA片段；再以这些双链DNA片段为巨型引物，运用慢退火PCR程序成功地扩增出全长ReCD3定点突变DNA片段，构建了库容为10⁶的抗CD3改型单链抗体定点诱变次级抗体库（MPCD3）及pfu为10¹³的MPCD3次级噬菌体抗体库。经过三轮亲和淘洗，最终获得亲和力较原来有所提高的抗体。 同时以上述工作为理论基础，运用DNA改组技术对ReCD3基因片段进行随机突变。大胆尝试了将80-100bp DNA酶Ⅰ酶切片段与引入定点诱变片段混合在一起，通过以自身为引物，自身为模板的PCR，最终获得理论库容应为10⁶-10⁷、实际库容为10⁷的抗CD3改型单链抗体DNA改组次级抗体库（ShuCD3）及pfu为10¹²的ShuCD3次级噬菌体抗体库。经过五轮淘选，筛选得到三株亲和力提高1-2倍的抗体。计算机分子模拟结果表明所得到的高亲和力抗体的三维结构发生了改变。