siRNA沉默PC3细胞中KDR基因表达的实验研究

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血管内皮生长因子受体-2(Vascular endothelial growth factor receptor-2/kinase-insert domain containing receptor:VEGFR-2/KDR)广泛分布于血管内皮细胞,也分布于部分肿瘤细胞表面,通过两个机制促进肿瘤发生发展:(1)旁分泌促血管生成作用:实体肿瘤细胞分泌VEGF,VEGF作用于肿瘤旁的血管内皮上的KDR,促使血管内皮细胞分裂增殖,促进新血管的生成,提高血管的通透性。(2)自分泌直接刺激肿瘤细胞增殖:部分肿瘤细胞,包括前列腺癌细胞,表达KDR,存在VEGF-KDR自分泌环,VEGF作用于自身后,促进肿瘤细胞生长。阻断KDR表达有望在两个水平起到抗肿瘤作用,KDR是基因治疗的良好靶标。 RNA干扰(RNAi)是由dsRNA介导的转录后基因沉默机制,当外源导入dsRNA被Dicer酶切割成19-23nt的小分子干扰RNAs(siRNA)后,与体内其它成分聚合形成RNA诱导型基因沉默复合体(RISC),然后活化的RISC可导致与siRNA互补靶序列的降解,从而导致特异的基因沉默效应。RNAi技术在基因敲除或诱导基因沉默等方面都取得了可喜成果,这些为本课题选择RNAi机制来抑制KDR的表达提供了理论依据。 我们首先用免疫细胞化学,免疫印迹技术及RT-PCR技术检测了5个前列腺癌细胞系中VEGF和KDR在蛋白水平及mRNA水平上的表达,
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