论文部分内容阅读
目的:本研究旨在探讨自噬调节药物包括自噬激活剂RAPA(rapamycin,雷帕霉素),自噬抑制剂HCQ(hydroxychloroquine,羟氯喹)和3-MA(3-methyl adenine,3-甲基腺嘌呤)对人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和凋亡的影响。方法:RPMI 8226细胞在正常血清培养条件下,分别加入RAPA、HCQ、3-MA处理,以正常血清培养的RPMI 8226细胞为对照组;MDC(Monodansylcadaverine,单丹磺酰戊二胺)染色法观察自噬小体数量;CCK-8(Cell Counting Kit-8,细胞计数试剂盒)法检测细胞增殖;FCM(flow cytometry,流式细胞术)测定细胞凋亡率;Western Blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC-3b(microtubule-associated protein 1 light chain 3,微管相关蛋白1轻链3b)、凋亡相关蛋白caspase-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3)、Bcl-2(B-cell lymphoma-2,B细胞淋巴瘤-2)、PARP(polyADP-ribose polymerase,多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶)表达水平。结果:荧光显微镜观察显示,RAPA处理的RPMI 8226细胞24 h后,自噬小体较对照明显增多,HCQ和3-MA处理的细胞自噬小体数量较对照组明显减少;RAPA和HCQ抑制RPMI 8226细胞增殖,且呈时间及剂量依赖性,而3-MA对细胞增殖无明显影响;不同浓度RAPA(0、100、500和1000 nmol/L)处理24 h后,细胞凋亡率(%)(X±SD)分别为0.9±0.3、9.1±1.2、28.6±0.8和43.9±2.1(P<0.05),不同浓度HCQ(0、4、8和16μmol/L)处理24 h后,细胞凋亡率分别为0.9±0.3、8.3±1.8、15.9±1.5和21.3±2.0(P<0.05)。不同浓度3-MA(0、5、10和20μmol/L)处理后的细胞凋亡率无统计学差异(P>0.05)。用RAPA作用24 h,随着浓度的升高,LC-3的表达水平升高,Bcl-2的表达水平下降,caspase-3、PARP表达水平升高。用HCQ作用24 h,随着HCQ浓度的升高,LC-3和Bcl-2的表达水平下降,而caspase-3、PARP表达水平升高。3-MA处理细胞24 h,随着浓度的升高,LC-3的蛋白表达水平下降,而caspase-3、PARP、Bcl-2的表达水平无统计学差异。结论:RAPA能诱导RPMI 8226细胞自噬,而HCQ和3-MA抑制自噬过程。RAPA和HCQ能抑制RPMI 8226细胞增殖并促进凋亡,3-MA对细胞增殖和凋亡无显著影响。