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本论文主要围绕肉羊饲养管理中营养需要量(能量、蛋白质)的确定和饲喂效率的评价两大问题展开相应的研究。首先,本研究以杜湖杂交F1代肉羊(公、母羔)为试验对象,使用饲养试验、比较屠宰试验和消化代谢试验相结合的方法,就该品种肉羊在20-50kg生长阶段的净能、代谢能和净蛋白质三个指标的维持和生长需要量指标进行了报道;其次,本研究在利用剩余采食量(Residual feed intake,RFI)这一新型的饲喂效率评价指标对饲喂效率进行评价的同时,通过对不同RFI组肉羊间体组成、生长性能、血清代谢激素指标、肉品质等指标的差异性研究,探索了可能参与调控不同RFI组肉羊间饲喂效率差异的生理因素;最后,通过研究不同RFI组肉羊在不同饲喂水平条件下的生长性能、血清代谢激素和生长轴相关基因表达的变化关系,旨在揭示影响不同RFI组肉羊在不同饲喂水平下生长速度和饲喂效率差异的相关生理和分子机制,并筛选RFI辅助标记选择物。1.杜湖F1代肉羊育肥期能量需要量研究旨在确定杜湖杂交F1代肉羊(公、母羔)育肥前期(20~35kg)和育肥后期(35~50kg)生长阶段的能量需要量,整个试验分四期实施进行。每期试验均采用饲养试验、比较屠宰试验和消化代谢试验相结合的方法,确定相应的能量需要量参数。以第一期试验(20~35kg杜湖杂交F1代母羔)为例,在比较屠宰试验正试期的第1st天从30只羊中随机挑选6只羔羊进行屠宰作为初始屠宰组(N=6),将其余24只羊分自由采食组(Ad libitum,AL;N=12)、低限饲组(Low restricted,LR;N=6)和高限饲组(High restricted,HR;N=6)3个采食量组进行饲喂,当自由采食组试验羊体重均重达到28kg时,从中挑选6只进行屠宰作为中期屠宰组(N=6),待其余自由采食量组试验羊在均重达到35kg时,将AL(N=6)、LR(N=6)和HR组(N=6)试验羊一并屠宰,该部分数据用于统计试验羊在不同营养水平和体重阶段的体能量沉积量。在消化代谢试验中,另外选择12只试验动物按照比较屠宰试验设计方案进行分组并置于消化代谢笼内饲养,当其均重达到目标体重(28kg)时,在5-7 d正试期内全粪尿收集法收集各组试验羊的粪尿样本,该部分数据用于计算不同采食量饲喂条件下试验羊的代谢能摄入量,综合所有上述数据及回归分析结果便可计算得到该期试验中试验羊的维持和生长能量(净能、代谢能)需要量。其余三期试验也按照上述设计(在屠宰期目标体重的设定上稍有差异)分别计算得不同性别和体重阶段试验羊的能量需要量结果。综合4期试验结果对比后发现:无论是公羔还是母羔而言,生长净能需要量(NEg),生长代谢能需要量(MEg)和代谢能维持利用效率(km)随着日龄的增加而升高,而维持净能需要量(NEm),维持代谢能需要量(MEm),和代谢能生长利用效率(kg)随着日龄的增加而降低。在相同日龄情况下,公羔的NEm和MEm高于母羔;而在相同日龄和日增重条件下,该品种肉羊母羔的NEg和MEg均高于公羔。20~35kg,35~50kg生长阶段杜湖杂交F1代公、母羔能量需要量如下所示:①一期试验:20-35kg杜湖杂交F1代母羔维持净能、代谢能需要量分别为260.62和400.61 kJ·kg-0.75 of SBW;代谢能维持利用效率(km)为0.65;生长净能、代谢能需要量分别为1.25-4.55 MJ/d和2.88-10.49MJ/d;生长代谢能利用效率(kg)为0.43。②二期试验:35-50kg杜湖杂交F1代母羔维持净能、代谢能需要量分别为254.10和386.49 kJ·kg-0.75 of SBW;代谢能维持利用效率(km)为0.66;生长净能、代谢能需要量分别为1.53-5.57 MJ/d和3.65-13.28 MJ/d;生长代谢能利用效率(kg)为0.42。③三期试验:20-35kg杜湖杂交F1代公羔维持净能、代谢能需要量分别为267.30和414.59 kJ·kg-0.75 of SBW;代谢能维持利用效率(km)为0.65;生长净能、代谢能需要量分别为1.06-4.13 MJ/d和2.41-9.39 MJ/d;生长代谢能利用效率(kg)为0.44。④四期试验:35-50kg杜湖杂交F1代公羔维持净能、代谢能需要量分别为259.42和399.91 kJ·kg-0.75 of SBW;代谢能维持利用效率(km)为0.65;生长净能、代谢能需要量分别为1.59-6.03 MJ/d和3.79-14.36 MJ/d;生长代谢能利用效率(kg)为0.42。2.杜湖F1代肉羊育肥期蛋白质需要量研究本研究旨在确定杜湖杂交F1代肉羊(公、母羔)育肥前期(20-50 kg)和育肥后期(35-50 kg)两个生长阶段的净蛋白质需要量指标,主要包括维持和生长净蛋白质需要量。四期试验亦采用饲喂试验、比较屠宰试验和消化代谢试验相结合的方法(具体方案参照试验一所述),最终分别确定其氮沉积量与氮摄入量,综合所有上述数据及回归分析结果便可计算得到该期试验羊的维持和生长净蛋白质需要量。试验结果表明:20-35kg生长阶段杜湖杂交F1代公、母羔的维持净蛋白质需要量分别为1.92和1.85g/kg of SBW0.75;35-50kg生长阶段杜湖杂交F1代公、母羔维持净蛋白质需要量分别为1.70和1.63g/kg of SBW0.75。20-35kg生长阶段杜湖杂交F1代公、母羔的生长净蛋白质需要量分别为14.20-40.36 g/d和12.74-32.28 g/d;35-50kg生长阶段杜湖杂交F1代公、母羔生长净蛋白质需要量分别为10.52-28.09 g/d和9.61-24.63 g/d。综合四期试验结果发现:杜湖杂交F1代肉羊的生长、维持净蛋白质需要量略低于NRC推荐量。随着日龄的增加,该品种肉羊的维持、生长净蛋白质需要量降低;在体重和生长速度相近的条件下,公羔的净蛋白质维持、生长需要量略高于母羔。3.不同RFI组肉羊生长性能、血液代谢指标和肉品质差异性研究以杜湖杂交F,代母羔为试验材料,目的在于研究RFI对生长期绵羊生产性能、体组成、血浆理化指标和肉质指标的影响。选择54只杜湖杂交F1代母羔(8周龄,22.49±2.26 kg)空腹称重后驱虫后置于单栏羊圈中,从试验开始(第0天)到第63天期间,每日清晨8:00点以TMR颗粒饲料进行自由采食饲喂,并保证自由饮水,在此期间记录试验羊的日采食量、每周称重一次用于计算平均日增重。依据试验羊的中期体重及日增重得到的预测采食量与实际采食量对试验动物进行RFI计算,并从中选择RFI值最高和最低的试验羊各6只用于后期的试验,对所选试验羊第15、30、45和60天与每日9:00、11:00、14:00和17:00通过颈静脉采血、分离血清进行理化指标的测定,并在试验第63天进行屠宰并对其体组成进行测定,同时收集背最长肌、腰肌和臀肌进行肉质测定。结果显示:高、低RFI组试验羊初期体重(BW0d)、末期体重(BW63d)和平均日增重(ADG)差异均不显著(P>0.05);料肉比(FCR)随着RFI和干物质采食量(DMI)的升高而显著升高(P<0.05);RFI与DMI(r = 0.68,P<0.001),FCR(r = 0.64,P<0.001)显著正相关,但与ADG无显著相关性(P>0.05);骨骼、内脏、胴体脂肪、内脏脂肪和总脂肪等组织鲜重占EBW比例在高、低RFI组试验羊间差异不显著(P>0.05),低RFI组试验羊肌肉鲜重占EBW比例显著高于高RFI组(P<0.05);低RFI组试验羊肌肉组织中水分和蛋白质占机体总含量比例均显著高于高RFI组(P<0.05);高RFI组试验羊脂肪组织中能量占机体总能量比例显著高于低RFI组(P<0.05);高、低RFI组母羔血清中胰岛素样生长因子,游离脂肪酸,甲状腺激素,甲状腺原氨酸,甘油三酯,尿素和葡萄糖浓度差异均不显著;高RFI组母羔的背最长肌pHu(屠宰24h后pH值)显著高于低RFI组(P<0.05),两组间腰肌和臀肌的pHu差异不显著(P>0.05),高RFI组试验羊背最长肌和腰肌2部位肌肉的嫩度较低RFI组略高(P<0.05),而臀肌嫩度差异不显著(P>0.05)。高、低RFI组母羔背最长肌、臀肌和腰肌的L*(亮度)、a*(红度)、b*(黄度)和pH1(屠宰45min后pH值)指标差异不显著(P>0.05)。本研究为可能参与不同RFI组肉羊饲喂效率差异相关机制提供了部分理论支撑,相应的结果还需要在其他家畜品种上进一步验证。4.营养水平对不同RFI组肉羊生长性能,血液代谢指标和生长轴相关基因表达的影响本研究的旨在通过研究RFI分组和营养水平处理对肉羊生长性能、血液代谢指标和生长轴相关基因表达量的交互效应,初探RFI肉羊在不同营养水平饲喂处理下饲喂效率、生长性能差异可能存在的机理机制。54只杜湖杂交F1代母羔空腹称重后驱虫后置于单栏羊圈中,从试验开始(第0天)到第63天与每日清晨8:00点以TMR颗粒饲料进行饲喂,保证试验羊每日自由采食和饮水,在此期间记录试验羊的日采食量、每周称重一次用于平均日增重(ADG)的计算;依据试验动物的体尺及生长状况得到的预测采食量与实际采食量对试验动物进行RFI分类。随后,选择高、低RFI组母羔各15只,按采食量水平随机分为自由采食组(AL)、低限饲组(LR)和高限饲组(HR)三组(每组10只,其中高、低RFI各5只)。在营养水平分组处理期间(第64天到132天),每周对试验羊称重1次,屠宰前3天颈部静脉采血测定血液代谢指标浓度和激素水平,试验末期(第132天)对所有羊(30只)进行屠宰,分别采集下丘脑、垂体、肝脏和背最长肌组织样,利用RT-PCR检测生长轴相关基因的mRNA表达。结果显示:能量负平衡增加了血浆中游离脂肪酸(NEFA)、生长激素(GH)浓度,垂体中GH mRNA表达量(P<0.05);降低了血浆中胰岛素样生长因子(IGF-1)、甘油三酯(TG)、甲状腺激素(T4)浓度,同时下调了肝脏中IGF-1、生长激素受体(GHR)和背最长肌IGF-1 mRNA的表达量(P<0.05)。在AL处理水平下,低RFI组母羔背最长肌GHR mRNA的表达量较高RFI组相比有升高的趋势(P=0.09),然而高、低RFI组试验羊间的这种差异随着限饲处理而消失(P>0.05)。在HR处理条件下,低RFI组母羔有较快的生长速度,同时伴随着较低的SSTR-2 mRNA表达量(P<0.05)和血浆NEFA浓度(P<0.05)。相关性分析结果表明:RFI与SSTR-2表达量显著正相关(r =-0.43;P<0.01),并有与肌肉GHR表达量负相关的趋势(r=-0.33;P=0.09);SSTR-2 mRNA分别与GHRHR和肝脏IGF-1表达量呈负相关(r =-0.43;P<0.01)和正相关(r =-0.43;P<0.01)。结论:本研究表明,能量负平衡主要通过调控血浆中相关代谢指标浓度和生长轴相关基因的表达量来抑制动物的生长;低RFI母羔对能量负平衡有着较优的抗逆性,在维持摄入量水平下可以更好的维持体重,同时伴随着更低的垂体SSTR-2 mRNA表达量,以及血浆中相对较低的NEFA和相对较高的TG浓度,由此推测低RFI组试验羊在HR处理下有着较快的生长速度可能与其在能量负平衡状态较弱的脂肪动员强度有关,也可能与SSTR-2可能参与的SST对非基础GH浓度水平的抑制作用有关。