均相电化学DNA生物传感器的构筑及其在药物分析中的应用研究

来源 :青岛农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:junar
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随着经济的不断发展,人们的饮食文化日益丰富,食品安全问题受到广泛关注。农药和兽药的滥用使得药物残留问题日益严重,进而威胁到人类健康。所以,对农药和兽药的残留分析具有非常重要的意义。因具有简单、灵敏、快速、成本低等优点,电化学 DNA生物传感器目前已经在食品安全、医学、环境等领域得到了广泛应用。在查阅大量文献和相关研究的基础上,本文通过设计发卡探针,借助目标与发卡探针的相互作用导致 DNA构型变化,发展了新型的均相、免固定的电化学DNA生物传感器,具体内容如下:  首先,基于有机磷农药对乙酰胆碱酯酶的抑制作用,建立了新型有机磷农药的均相电化学生物传感新方法。当汞离子存在时,末端标记电化学活性物质亚甲基蓝(MB)的发卡(HP)探针,通过 T-Hg2+-T碱基配对可折叠成茎环发卡结构,此状态下可以阻止核酸外切酶I的水解,因为HP和带负电荷的ITO电极之间有很大的静电排斥,MB远离电极表面所以产生的电化学信号很小。乙酰胆碱酯酶水解硫代乙酰胆碱生成胆碱,胆碱带有的巯基(-SH)与HP探针中汞离子结合,HP探针的发卡结构被破坏,核酸外切酶I发挥作用水解单链DNA从而产生单核苷酸,单核苷酸和ITO之间的静电排斥力非常弱,MB容易扩散至电极表面导致电化学响应增加。有机磷农药抑制乙酰胆碱酯酶的活性,导致水解产物中带巯基的胆碱量减少,电化学信号也随之降低。本实验以二嗪磷作为目标分析物,在最佳实验条件下,二嗪磷的检测限可以达到0.25μg L-1。实验结果表明这个方法检测实际样品中的有机磷农药残留有很大的潜力,期望能够用于生化分析和食品安全领域。  其次,利用目标物引导和T7核酸外切酶辅助的双循环信号放大策略,设计了一个高灵敏和高特异性的均相电化学适体传感器用于抗生素的残留的分析检测。基于发卡探针和单核苷酸对带负电荷的ITO电极扩散率的显著不同差异实现目标物的分析检测。在实验中选择氨苄青霉素作为目标分析物,检验该体系的分析性能。实验结果表明该体系对氨苄青霉素具有良好的选择性,检测限可达4.0 pM,并成功应用于牛奶中抗生素残留的检测。另外,与基于固定的电化学方法相比,该传感系统避免了繁琐和耗时的电极修饰步骤,实验过程更简单和方便。因此,有理由相信其在食品安全领域用6于抗生素残留分析检测极具潜力。
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