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缺血性脑血管病是临床常见病、多发病，有极高的致死率和致残率，恢复血流造成的再灌注损伤是其重要病理生理过程，因此防治脑缺血再灌注损伤是治疗缺血性脑血管病的必要步骤。黄芪是临床治疗缺血性脑血管病的常用药物之一，通过减少神经元死亡、促进神经修复再生等机制发挥防治作用。已知黄芪含有皂苷类、多糖类、黄酮类等多种具有生物活性的物质，但是哪一种有效部位或成分在抗神经元死亡过程中起主要作用尚不清楚，因此黄芪具有重大研究和充分开发利用价值。本实验室前期研究发现黄芪注射液可减少海马CA1区受损神经元的凋亡。本研究以改良Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，以血塞通为阳性对照药，检测各组大鼠脑梗死面积、神经功能评分、大脑重量和含水量指标并进行评价，在黄芪水提取物和乙醇提取物中选出防治脑缺血再灌注损伤疗效较佳者；通过免疫组织化学染色测定大鼠缺血侧视交叉附近皮质半暗区Cyt C、Cyp D、p53、bax和bcl-2的表达，蛋白印迹定量检测胞质和线粒体Cyt C、线粒体Cyp D，紫外分光光度计检测分离线粒体的肿胀度，为黄芪防治脑缺血再灌注损伤提供依据，为黄芪有效部位或化学成分的进一步筛选奠定基础。第一部分黄芪提取物减轻大鼠脑缺血再灌注损伤作用研究目的：比较黄芪水提取物和乙醇提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤的防治作用。方法：1模型制备及分组SPF级，雄性SD大鼠随机分为假手术组(S)，左侧大脑中动脉缺血再灌注模型组(M)，黄芪水提取物低(WL)、中(WM)、高(WH)剂量用药组，黄芪乙醇提取物低(AL)、中(AM)、高(AH)剂量用药组，血塞通用药组(B)。ig给药，qd，6d，S和M大鼠给等量纯水，第6d给药1h后行短暂性大脑中动脉栓塞手术，再灌注20h给药1次。改良Longa线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型，选取模型成功大鼠脑组织用于各项指标的检测。2脑梗死面积检测断头取大脑，沿冠状面切成5片。TTC溶液染色，拍照，计算大脑梗死面积。3神经功能评分成功模型再灌注24h时，对大鼠表现出的神经缺损体征做出评分，包括自发同侧旋转、对侧后肢回缩实验、杆穿过实验和双前爪抓握实验。4大脑重量和含水量的测定大脑和缺血侧大脑半球称量湿重。缺血侧大脑半球烘干称干重，计算缺血侧脑含水量：脑含水量（%）=(湿重-干重)/湿重×100%。结果：黄芪水提物和醇提物对脑缺血再灌注后的大鼠脑组织有保护作用，如可明显减小脑缺血再灌注导致的大鼠神经功能评分，缩小脑梗死体积和降低脑含水量。1黄芪提取物对神经功能评分的影响M大脑神经功能评分高于S (P＜0.05)。WM、WH、AM、AH、B低于M (P＜0.05)；B、WH、AH无差异(P>0.05)。2黄芪提取物对脑梗死面积的影响M梗死面积高于S （P<0.05）。WM、WH、AM、AH、B小于M（P<0.05）；其中AH最小。3黄芪提取物对缺血侧大脑重量和含水量的影响M大脑重量和缺血侧脑含水量大于S（P<0.05）。WM、WH、AM、AH、和B小于M（P<0.05）；B、WH、AH无差异（P>0.05）。小结：1黄芪水提物和醇提物均可明显减小脑缺血再灌注导致的大鼠神经功能评分，缩小脑梗死体积，降低脑含水量，对脑缺血再灌注后的大鼠脑组织有保护作用。2醇提物比水提物效果好。第二部分黄芪提取物对脑缺血再灌注大鼠脑组织线粒体功能的影响目的：探讨黄芪提取物对脑缺血再灌注大鼠脑组织线粒体功能的影响方法：大鼠随机分为假手术组(S)，左侧大脑中动脉缺血再灌注模型组(M),黄芪乙醇提取物用药组(E)，环孢素对照组(C),黄芪乙醇提取物加环孢素组(EC)。免疫组织化学染色测定半暗区Cyt C、Cyp D、p53、bax和bcl-2的表达，蛋白印迹检测胞质及线粒体Cyt C和线粒体Cyp D的含量，分光光度计测定分离线粒体的肿胀度。结果：光镜下假手术组大脑皮质各层细胞排列规则、整齐，核膜、核仁清晰，锥体细胞和颗粒细胞内含少量棕黄色颗粒。模型组术侧大脑皮质正常区和梗死区之间有一缓冲区域（半暗区），半暗区大脑皮质增厚、细胞排列稍紊乱、炎细胞浸润、间质水肿，但神经细胞的核膜、核仁清晰，偶有神经元胞膜皱缩、形态不规则，锥体细胞和颗粒细胞内有大量的棕黄色颗粒、堆积呈块状。实验组和对照组出现类似模型组术侧大脑皮质的情况，但程度轻/重，棕黄色颗粒少/多。黄芪提取物可明显下调脑缺血再灌注诱导的Cyt C、Cyp D、p53和bax的表达，上调bcl-2的表达，减少线粒体内CytC向胞质的释放，减轻线粒体膜通透性。1黄芪提取物对Cyt C表达的影响Cyt C表达于大脑皮质神经细胞的胞质内，脑缺血再灌注诱导其表达上调，黄芪提取物可下调此诱导反应。M Cyt C高于S (P<0.05)。E，C和EC三者无差别(P>0.05)且均低于M (P<0.05)。2黄芪提取物对Cyp D表达的影响Cyp D主要表达于大脑皮质神经元的胞质内，脑缺血再灌注诱导其表达上调，黄芪提取物下调了脑缺血再灌注诱导的Cyp D表达。M Cyp D高于S (P<0.01)。E，C，EC三者低于M (P<0.05)；C三者中的最小者(P<0.05)。3黄芪提取物对p53表达的影响p53在大脑皮质神经元的胞质内有表达，脑缺血再灌注导致其表达上调，黄芪提取物明显下调了脑缺血再灌注诱导的p53高表达。M p53高于S (P<0.01)。E，C，EC均低于M (P<0.05)；E和EC无差异(P>0.05)。4黄芪提取物对bax表达的影响bax主要表达于大脑皮质神经元的胞质内，脑缺血再灌注诱导bax表达上调，黄芪提取物下调了脑缺血再灌注诱导的bax表达。M bax高于S(P<0.01)。E小于M (P<0.05)。5黄芪提取物对bcl-2表达的影响bcl-2主要表达于大脑皮质神经元的胞质内，脑缺血再灌注诱导bcl-2表达下调，黄芪提取物上调了脑缺血再灌注诱导的bcl-2低表达。M bcl-2低于S (P<0.01)。E高于M (P<0.05)。6黄芪提取物对Cyt C含量的影响正常时Cyt C存在于神经细胞的线粒体内，脑缺血再灌注诱导Cyt C表达增强、线粒体内的Cyt C易位胞质，黄芪提取物可下调脑缺血再灌注导致的Cyt C高表达、抑制Cyt C向胞质易位。分为胞质和线粒体内的Cyt C。胞质内M Cyt C含量高于S (P<0.001)；E，C和EC三者低于M(P<0.05)；三者中E的含量最低(P<0.05)。线粒体M Cyt C含量高于S(P<0.01)；E和C低于M (P<0.05)，EC与M无差别(P>0.05)；E和C无区别(P>0.05)。7黄芪提取物对Cyp D含量的影响Cyp D在神经细胞的线粒体内表达，脑缺血再灌注诱导Cyp D高表达，黄芪提取物可下调脑缺血再灌注诱导的Cyp D高表达。线粒体Cyp DM高于S (P<0.01)。E，C和EC三组低于M (P<0.01)；其中C最小(P<0.01或0.05)，C和EC无区别(P>0.05)。8黄芪提取物对分离线粒体肿胀度的影响透光度下降值越大说明线粒体肿胀程度越明显、线粒体功能越异常。M透光度下降值大于S (P<0.01)。E，C和EC均小于M (P<0.01)；三者中E最小(P<0.01)。小结：黄芪提取物可明显减轻脑缺血再灌注导致的线粒体肿胀，减少Cyt C、Cyp D、p53和bax的表达，增强bcl-2的表达，减轻线粒体Cyt C的外漏，对脑缺血再灌注后大鼠脑组织的线粒体起保护作用。结论：1黄芪提取物可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤导致的神经缺损行为、缩小脑梗死面积、减轻脑水肿，乙醇提取物效果较好。2黄芪提取物可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤导致的线粒体肿胀、减少线粒体Cyt C外漏、下调Cyt C、Cyp D、p53和bax的表达及上调bcl-2的含量。