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本文从以下几个方面进行论述。 第一部分 顺铂所致卵巢早衰大鼠模型的构建 目的:建立顺铂所致大鼠卵巢早衰模型。 方法:Wistar大鼠随机分为三组:正常组、顺铂低剂量组、顺铂高剂量组。于第1、8天分别腹腔注射,正常组注射2.0ml生理盐水,低剂量组注射顺铂溶液4.5mg/kg,高剂量组注射顺铂溶液6.0mg/kg,第二次注射后于动情间期采用1%戊巴比妥钠麻醉后,腹主动脉取血,取上清及双侧卵巢。低剂量组、高剂量组留取部分大鼠观察的动情周期。通过观察大鼠的一般情况,称量大鼠卵巢湿重,采用酶联免疫吸附法测定性激素的改变,来评估顺铂造成卵巢早衰模型的剂量。 结果:低剂量组及高剂量组大鼠在注射顺铂后出现活动减少,拥挤在一起,毛发暗淡发黄,无光泽。注射顺铂后,与正常组相比,高剂量组体重下降明显(为P<0.01)。低剂量组和高剂量组大鼠表现为不同程度的动情周期紊乱,低剂量组动情周期延长,高剂量组表现为持续的动情间期。与正常组相比,大鼠血清AMH水平低剂量组明显下降(P<0.05);高剂量组大鼠卵巢湿重、血清AMH水平、雌激素水平均明显下降,血清FSH水平明显升高(P<0.01)。 结论:研究结果显示大鼠腹腔注射顺铂6.0mg/kg能够形成较理想的卵巢早衰模型。 第二部分 归肾丸对卵巢早衰大鼠卵巢储备的作用 目的:探讨归肾丸及脱氢表雄酮(DHEA)对顺铂所致POF大鼠卵巢储备功能的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为四组:正常组、POF模型组、归肾丸组及DHEA组。于第1、8天分别腹腔注射,正常组注射2.0ml生理盐水,其余三组注射顺铂溶液6.0mg/kg。归肾丸组及DHEA组大鼠分别给予适量归肾丸及DHEA灌胃,正常组及POF模型组大鼠给予等量双蒸水灌胃。在灌胃7天、14天、21天后于动情间期麻醉大鼠,留取腹主动脉血、双侧卵巢标本。通过观察在治疗的不同时间点,大鼠的体重,采用ELISA法测定血清AMH、FSH、雌激素的水平,Real-Time PCR法检测卵巢中AMHmRNA及ErβmRNA的含量来评估药物对卵巢储备的影响。 结果:1.大鼠体重:与正常组相比,模型组及各治疗组大鼠体重在灌胃的第7天明显降低(P<0.01)。 2.血清ELISA结果:与正常组相比,模型组血清AMH水平在灌胃的第7天、14天及21天明显降低(P<0.01);与模型组相比,在灌胃的第21天归肾丸组血清AMH水平显著升高(P<0.05)。与正常组相比,模型组血清FSH水平在灌胃的第7天及14天显著增加(P<0.01),血清雌激素水平在灌胃的第7天、14天显著降低(P<0.01)。 3. Real-Time PCR结果:与正常组相比,模型组卵巢AMH mRNA表达量在灌胃的第7天、14天及21天明显降低(P<0.05);与模型组相比,归肾丸组在灌胃的第21天显著增加(P<0.05)。与正常组相比,模型组ERβ mRNA表达水平在灌胃的第7天、14天显著降低(P<0.01)。 结论:归肾丸在改善卵巢储备功能方面具有较好的效果。