【摘 要】
：
RNA纳米技术正在发展成为一个有前景的治疗应用平台,无疑激发了人们对其在纳米医学应用的研究兴趣。基于RNA纳米技术设计与构建的多功能RNA纳米粒子（RNPs）具有可控的形状、大小、治疗效应等特点,在纳米医学领域显示出巨大的应用前景。本论文致力于研究RNPs细胞膜转运的快速动态过程,有助于我们对RNA纳米药物的进一步了解,为多功能RNA纳米药物、m RNA疫苗的研制、优化与临床转化提供理论依据。本论
论文部分内容阅读
RNA纳米技术正在发展成为一个有前景的治疗应用平台,无疑激发了人们对其在纳米医学应用的研究兴趣。基于RNA纳米技术设计与构建的多功能RNA纳米粒子（RNPs）具有可控的形状、大小、治疗效应等特点,在纳米医学领域显示出巨大的应用前景。本论文致力于研究RNPs细胞膜转运的快速动态过程,有助于我们对RNA纳米药物的进一步了解,为多功能RNA纳米药物、m RNA疫苗的研制、优化与临床转化提供理论依据。本论文以Antimir21-RNP-Apt为模型,研究RNPs细胞膜转运以及在细胞内递送的过程。利用基于原子力显微镜（AFM）高时空分辨率的力示踪技术,在单粒子水平上评价了Antimir21-RNP-Apt和Antimir21-RNP-MUT进入不同细胞系的动态参数。此外,通过基于高分辨率的转盘式共聚焦显微镜的实时荧光示踪对Antimir21-RNP-Apt的细胞内递送进行跟踪。本论文的主要研究内容如下:1.利用高时空分辨率的力示踪技术,监测了单个靶向RNA纳米药物Antimir21-RNP-Apt在生理条件下进入三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-231细胞,细胞表面EGFR过表达）的跨膜动态机制。测量了Antimir21-RNP-Apt细胞膜转运的参数,如力、持续时间、位移、平均速率、内吞效率。Antimir21-RNP-Apt跨膜力的范围为22-77 p N,平均值为46±12 p N,持续时间在27.1-189.5 ms,平均值为81.9±39.8 ms,平均位移为26.0±1.6 nm,平均速率为0.40±0.19μm·s-1,观察到力信号的概率为18.3%。2.研究了Antimir21-RNP-MUT（突变序列MUT替换掉靶向EGFR的适配体序列,无靶向特异性）进入MDA-MB-231细胞以及Antimir21-RNP-Apt进入正常人肾细胞（HEK-293细胞,细胞膜表面几乎不表达EGFR）的跨膜转运参数。我们发现Antimir21-RNP-MUT进入MDA-MB-231细胞的持续时间缩短为69.5±47.2 ms,内吞力几乎不变,Antimir21-RNP-Apt进入HEK-293细胞的持续时间缩短为50.8±20.8 ms,内吞力无显著性差异。结果表明,Antimir21-RNP-Apt携带的EGFR适配体（Apt）与细胞膜表面过表达的EGFR的特异性相互作用可以延长Antimir21-RNP-Apt进入细胞的时间。将力示踪技术与共聚焦荧光成像结合,利用不同的特异性抑制剂分别阻碍不同跨膜蛋白介导的细胞内吞途径,研究了Antimir21-RNP-Apt进入MDA-MB-231细胞的跨膜转运机制,结果发现Antimir21-RNP-Apt主要通过网格蛋白介导的内吞途径进入细胞。3.利用基于转盘式激光共聚焦显微镜的单颗粒示踪技术,研究了Antimir21-RNP-Apt在MDA-MB-231细胞内转运的动态过程。分别用不同的荧光分子标记细胞器,通过共聚焦荧光成像分析Cy3标记的Antimir21-RNP-Apt在细胞内的递送路径。随着孵育时间的增加,Antimir21-RNP-Apt与不同的细胞器共定位,这种时间演化反映了Antimir21-RNP-Apt从早期内体到晚期内体,并最终进入溶酶体的胞内递送顺序。动态分析表明,Antimir21-RNP-Apt在早期内体中的活性低,而在晚期内体中的活性高。
其他文献
近年来,细菌感染对人类生产和生活造成了严重的影响。如果不能有效得到控制的话,到2050年将会导致1000万人死亡,损失高于100万亿美元。目前传统的治疗方法是使用抗生素,虽然挽救了无数人的生命,但是抗生素的误用尤其是滥用会导致耐药菌株的出现。然而根据目前的情况来看,开发新的抗生素所需要的时间远远赶不上细菌耐药性产生的速度,因此迫切需要开发新的抗菌策略。目前光响应抗菌治疗得到广泛关注。例如:抗菌光动
蛹虫草是非常重要的一种食药同源的可食用真菌,含有丰富的活性物质,具有抗肿瘤、抗氧化、和提高人体免疫力等功效,一直是广大消费者非常喜爱的功能保健食品。近年来,蛹虫草优异功能基因挖掘和定向培育高活性新菌种,一度成为热点研究领域。但由于传统的真菌遗传改造方法需要使用抗性标记,而目前可使用的抗性标记基因非常有限。导致蛹虫草遗传改造面临着可用抗性基因数量不足的问题,进而限制了多个目的基因的连续敲入或敲除,因
谷胱甘肽（glutathione,GSH）存在于所有动物细胞中,正常情况以硫醇还原性存在,是细胞内主要的非蛋白质巯基化合物,是人体内一种非常重要的物质,能够参与机体的多种代谢条件,对维持人体的正常功能有重要的作用。由于GSH是小分子物质,相较SOD等大分子物质能够较容易地进入细胞,因而GSH能够有效地对细胞内外的氧自由基发挥清除作用,在许多生命活动中起着直接或者间接的作用,包括基因表达调控,酶活性
脊髓损伤会中断大脑和周围神经的联系,导致患者丧失部分或者全部的感觉和运动功能,甚至危及生命。然而脊髓的自我修复能力有限,因此对受损脊髓进行有效的修复仍是医学界的难题之一。随着组织工程的不断发展,目前利用脊髓损伤修复支架来促进受损脊髓再生是一种非常有前景的方法。对于脊髓损伤修复支架而言,与脊髓相似的柔软特性和高导电性对脊髓的修复非常有益。此外,类似于细胞外基质的多孔结构也能促进脊髓损伤后的神经细胞再
在过去的50年里,恶性黑色素瘤的发病率在全球范围内不断上升,是所有恶性肿瘤中进展最快、预后最差的恶性肿瘤之一。在过去,手术切除和药物化疗一直是恶性黑色素瘤的主要治疗手段。尽管这些治疗方法的引入使恶性黑色素瘤的治疗取得了一定的进展,但手术的创口问题、肿瘤组织的残留问题以及长期化疗带来的耐药性问题都限制了恶性黑色素瘤的治疗效率。光动力治疗（PDT）作为一种微创、无耐药性的治疗方法为恶性黑色素瘤的治疗带
随着人口老龄化社会的到来,医疗卫生水平的提升,人类对寿命延长的需求越来越迫切。衰老是一个自然过程,其特征是各种分子途径逐渐恶化,稳态完整性不断的丧失,受损大分子的不断累积,最终导致功能的损害和死亡风险的增加。衰老受到遗传和环境因素的动态影响,现如今对于衰老机制的研究纷繁众多,其中较为经典的理论有:遗传基因的改变、线粒体功能的失衡、细胞的衰老以及相互作用、蛋白质稳态的失衡和营养感应失调等。衣康酸是哺
光动力治疗（Photodynamic therapy,PDT）是利用光敏剂在特定的光源下激发氧分子产生活性氧（ROS）,以杀死肿瘤细胞的一种典型的光化学疗法。石墨氮化碳（g-C3N4）作为一种带隙约为2.76 e V的无金属聚合物半导体,有研究将其作为光敏剂用于PDT,以利用可见光（Vis）产生ROS。但是g-C3N4具有带隙较窄导致光生电子-空穴对复合较快的问题,限制了其PDT效率。因此有研究通
目的 分析人性化护理在精神分裂症恢复期患者中的应用效果。方法 选取2020年2月～2021年3月本院收治的100例精神分裂症恢复期患者，根据随机数字表法分为两组，各50例，对照组采用常规护理，观察组采用人性化护理，对比两组阴性症状量表（SANS）评分、住院精神病患者康复疗效评定量表（IPROS）评分、护士用住院患者观察量表（NOSIE-30）评分以及满意度。正态计量资料采用t检验，计数资料采用x2
目的：探讨阶段式康复护理对精神分裂症患者的干预效果。方法：选取2017年4月—2022年3月湖南省郴州市精神病医院收治的100例精神分裂症患者作为研究对象，根据随机数字表法分为研究组与参照组，各50例。参照组给予常规护理，研究组在参照组基础上给予阶段式康复护理干预。比较两组康复效果、服药依从性、护理满意度、生活质量。结果：护理前，两组社会功能缺陷筛选量表（SDSS）、阴性和阳性症状量表（PANSS
天然多酚提取物，如茶叶提取物常用于替代肉制品中的合成抗氧化剂。该研究通过测定水分含量、水分活度、硫代巴比妥酸反应物（Thiobarbituric Acid Reactants,TBARS）含量、以及质构、色差、低场核磁共振波谱和感官鉴定探究不同茶叶提取物对广式腊肠品质的影响。结果表明，添加提取物的广式腊肠TBARS值由9.83 mmol MDA/g降低至2.32 mmol MDA/g以下，挥发性盐