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目的:（1）探讨通过QBI-293A细胞来完成重组腺病毒（Adv-mIL-12、Adv-EGFP）的扩增、纯化及效价检测。（2）经门静脉注射不同剂量的Adv-mIL-12,探讨注射剂量与IL-12表达量之间的关系。（3）探讨经门静脉注射Adv-mIL-12时,应用Intralipid对IL-12表达量的影响及对机体的毒性反应,旨在为有效的利用Adv-mIL-12抗肝癌肝内微转移的实验研究奠定基础。方法: （1）在10%的DMEM培养基中,对QBI-293A细胞进行大量培养,然后对重组腺病毒（Adv-mIL-12、Adv-EGFP）进行扩增,应用氯化铯密度梯度离心法和TCID50法对腺病毒纯化和效价检测。（2）不同剂量的Adv-mIL-12(5×108Pfu/Rat、1×109Pfu/Rat、3×109Pfu/Rat、5×109Pfu/Rat、1×1010Pfu/Rat)经门静脉注射,ELISA法检测血清及肝脏组织中72小时IL-12的表达含量,探讨不同剂量的Adv-mIL-12在血清和肝组织中IL-12表达情况;尾静脉注射不同剂量的Intralipid（0mg、50mg、100mg、150mg、200mg）后,5×108Pfu/Rat剂量的Adv-mIL-12从门静脉注射,72小时后ELISA法检测不同剂量Intralipid对血清IL-12浓度的影响:再用150mg的Intralipid和5×109Pfu/Rat的Adv-mIL-12对大鼠进行干预,通过对脏器匀浆,取组织上清液ELISA法检测72小时肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、心脏IL-12的表达量。（3）分单纯Adv-mIL-12组、Intralipid组（脂肪乳+Adv-mIL-12）、Adv-EGFP组、Saline组（生理盐水对照组）四组。观察当Adv-mIL-12、Adv-EGFP剂量为5×109Pfu/Rat和Intralipid为150mg时,血清中IL-12、IFN-γ/的浓度随时间变化的趋势及ALT、AST情况,并在干预后1天,用CD68抗体对大鼠Kupffer细胞进行免疫组织化学染色并在显微镜下计数;ELISA法观察急性炎症因子TNF-α、IL-6在6小时的血清水平。结果: （1）重组腺病毒Adv-mIL-12和Adv-EGFP经扩增、纯化后效价分别约1.4×1010pfu/ml和2.0×1010pfu/ml。（2）注射较低病毒剂量（5×108-1×109Pfu/rat）Adv-mIL-12后,72小时检测血清和肝脏中IL-12表达含量较低且出现平台期,而当剂量增加到3×109Pfu/rat以后,血清和肝脏中IL-12含量明显升高,至少达到了较低剂量下的3倍,和较低剂量下IL-12表达量比较均具有显著性差异,且随Adv-mIL-12剂量增加,IL-12表达量有明显的增加;当Adv-mIL-12剂量为5×108Pfu/Rat时,随着Intralipid剂量的增加,血清中IL-12含量较Intralipid剂量为0时增加明显,当Intralipid剂量为150mg时血清中IL-12含量比未应用Intralipid时提高了2倍多,在剂量增至200mg时,我们随后观察到个别大鼠出现呼吸急促、进食和活动明显减少的现象,应用Intralipid血清中IL-12含量和未应用时比较有显著性差异;用150mg的Intralipid和5×109Pfu/Rat的Adv-mIL-12对大鼠进行干预72小时后,五个脏器（肝、脾、肺、肾、心）IL-12表达含量,肝脏中最高,这样可以在肝脏局部形成高浓度的IL-12。统计学分析:肝脏和其它脏器中IL-12含量比较具有显著性差异。（3）各时间点检测血清中IL-12含量,Intralipid组明显高于其它各组,各组IL-12血清含量在第3天达到最高,以后逐渐降低,在18天时,Intralipid组血清中仍然检测出IL-12的表达;血清中IFN-γ含量除在第1天,Intralipid组小于Adv-EGFP组、单纯Adv-mIL-12组外,其它各时间点Intralipid组均高于其它各组,统计学比较具有显著性差异;和Saline组相比,在第1天时,其它三组大鼠Kupffer细胞数目减少,均有统计学意义,但Intralipid组Kupffer细胞数目的减少明显少于单纯Adv-mIL-12组和Adv-EGFP组;在实验第1天,除Saline组外,其它三组ALT、AST均有较明显的升高,但Intralipid组较其它腺病毒组升高明显,在3天时,各组中ALT、AST即有明显的降低,到18天时,ALT、AST数值已基本恢复正常;在实验6小时,和Saline组比较,其它三组血清急性炎症因子TNF-α、IL-6的水平明显升高,具有显著性差异,Intralipid组TNF-α的血清浓度在三个腺病毒组中最低,但IL-6的血清浓度最高,和其它两个病毒组比较具有统计学意义。结论: （1）QBI-293A细胞能够对Adv-mIL-12、Adv-EGFP重组腺病进行大量扩增,经过对扩增后的腺病毒进行纯化及病毒滴度检测,能够得到较高的病毒滴度。（2）经门静脉注射应用Adv-mIL-12时,IL-12的表达存在阈值效应:即当应用的病毒剂量超过某一值时,其血清和肝脏IL-12表达量较前可大幅提高。（3）和直接门静脉注射应用Adv-mIL-12比较,在应用Adv-mIL-12前通过大鼠尾静脉注射一定量的Intralipid,可明显提高血清中IL-12表达量;同时,应用Intralipid后,各脏器IL-12表达含量比较,肝脏仍然最高。（4）门静脉直接注射应用Adv-mIL-12和在之前应用Intralipid均可引起大鼠肝脏功能的暂时性损伤;和直接应用Adv-mIL-12比较,在应用Intralipid后,血清急性炎症因子TNF-α的水平明显较低,但血清中IL-6水平较高。