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痰喘半夏颗粒由制半夏、白芍、沉香、白芷、五味子、酸枣仁、甘草、细辛、朱砂等24味药组成。经朱砂水飞成极细粉,制半夏、川贝母、肉桂等10味药材粉碎成细粉,甘草、白芷、五味子等12味加水煎煮2次,滤液浓缩成清膏,加入上述粉末,拌匀,制粒,干燥,过筛,喷加薄荷油制成。具有止咳,化痰,平喘的作用。用于治疗新老咳嗽,痰多气喘。规格为每袋装3 g。由于该品种现行质量标准控制项目过于简单,企业生产的产品无有效的质量控制方法,造成不同批次间质量存在较大差异,因此有必要对其质量标准进行提高。本文对痰喘半夏颗粒的质量标准提高进行了研究。分别从处方制法、显微鉴别、薄层鉴别、液相鉴别、检查、含量测定、指纹图谱六方面进行,并从中提炼出可行的检验方法建立了质量标准。处方和制法沿用原标准的药味和工艺,为方便生产,将原处方中1800 g的制成总量,统一为1000 g,同时对处方中各药味的投料量进行换算。朱砂13.3 g水飞成极细粉备用;制半夏266.7 g、川贝母26.7 g、肉桂26.7 g、豆蔻(去壳)26.7 g、沉香26.7 g、丁香26.7 g、西洋参26.7 g、白芷106.7 g、细辛106.7 g、天竺黄10 g粉碎成细粉,与上述朱砂粉配研,混匀;陈皮160 g、川芎106.7 g、麸炒枳壳106.7 g、麸炒白术106.7 g、麸炒青皮106.7 g、泽泻106.7 g、麸炒白芍106.7 g、山楂106.7 g、制五味子106.7 g、酸枣仁106.7 g、干姜71.1 g加水煎煮2次,第一次4小时,第二次3小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成清膏,加入上述粉末,拌匀,制粒,干燥,过筛,喷加薄荷油,制成1000 g。原处方中制成总量为1800 g,为方便生产,统一为1000 g。采用显微鉴别对该制剂中的原料药材制半夏、川贝母、肉桂、豆蔻、沉香、朱砂进行鉴别,结果选取大型草酸钙针晶束(制半夏)、淀粉粒(川贝母)、石细胞(肉桂)、胚乳细胞淀粉团(豆蔻)、具缘纹孔导管碎片(沉香)、朱砂此六种可视率较高部位列入标准草案。采用薄层色谱(TLC)分别对该制剂中原料药材白芍、白芷、五味子、酸枣仁药味进行定性鉴别,分别采用对照药材和对照品进行随行对照。结果:白芍、白芷、五味子、酸枣仁重复性和重现性均较好,10批样品均能检出,因此四个薄层鉴别列入标准草案;采用高效液相色谱法(HPLC)法对该制剂的原药材沉香的沉香四醇进行定性鉴别,同时以沉香对照药材中的特征峰进行同时对照,C18柱分离,以乙腈-0.5%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长250nm,结果:10批样品检出沉香四醇和沉香药材的特征峰,因此HPLC法鉴别沉香列入标准草案。采用HPLC法对痰喘半夏颗粒中的马兜铃酸A进行检查和测定。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,乙腈-0.5%磷酸溶液(38:62)洗脱,检测波长320 nm。理论板数按马兜铃酸A峰计算应不低于5000。结果:专属性试验阴性无干扰,10批样品中均未检出,考虑到对毒性成分控制的必要性,因此列入标准草案,其含量上限根据日服量设定,每袋含马兜铃酸A(C17H11NO7)不得超过1.00 μg。采用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)对痰喘半夏颗粒中的铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)进行检查和测定。按201 5版药典中铅、镉、汞、砷、铜测定法(通则2321)测定,结果:10批样品中各元素的平均含量为Pb 0.03μg/g;Cd 0.02 μg/g;As均未检出;Hg 8398.39 μg/g;Cu 5.03 μg/g,所有批次中的Pb、Cd、As、Cu的含量均远低于药典中甘草的标准要求,因此此4个元素不上标准正文。朱砂既是有效成分,又是毒性成分,痰喘半夏颗粒中的Hg基本全部来源于朱砂。因此将Hg含量列入标准草案,并设置上限和下限,每袋含Hg应为20.2～33.8 mg。采用HPLC法同时测定痰喘半夏颗粒中芍药苷、沉香四醇、甘草苷、甘草酸、五味子醇甲的含量。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱;以乙腈为流动相A,以0.5%磷酸水溶液为流动相B,梯度洗脱(0 min,15%A;24 min,18%A;28 min,38%A;59 min,47%A),检测波长218 nm(五味子醇甲)、235 nm(芍药苷)、250 nm(沉香四醇、甘草酸)、272 nm(甘草苷),理论板数按芍药苷峰计算应不低于15000。结果:专属性试验阴性无干扰,芍药苷、沉香四醇、甘草苷、甘草酸、五味子醇甲分别在194.6～6811.0 ng,41.06～1437.1 ng,97.08～3397.8 ng、80.7～2824.5 ng、3.33～116.55 ng范围内线性关系良好,10批样品中芍药苷、沉香四醇、甘草苷、甘草酸、五味子醇甲的平均含量分别为每袋5.36、1.27、2.59、2.22、0.11 mg。五味子醇甲含量较低,峰面积过小不列入标准草案,其余四种成分列入标准草案,其含量下限定为每袋含白芍以芍药苷(C9H9NaO5)计,不得少于4.3 mg;每袋含沉香以沉香四醇(C17H1806)计,不得少于1.0 mg;每袋含甘草以甘草酸(C4262O16)计,不得少于1.8 mg,以甘草苷(C21H22O9)计,不得少于2.0mg。采用HPLC法建立痰喘半夏颗粒的指纹图谱,以10批样品生成标准指纹图谱,计算10批样品的相识度。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,以乙腈为流动相A,0.0%甲酸溶液为流动相B,梯度洗脱(0 min,7%A;20 min,17%A;35 min,24%A;45 min,41%A;70 min,58%A);检测波长235nm,对10批痰喘半夏颗粒的相似度进行了分析,结果:相似度在0.972～0.995之间,相似度平均值为0.9875。在此基础上通过高效液相色谱-质谱法(LCMS-Q-TOF)联用技术,选择电喷雾离子源(ESI),在正离子检测模式和负离子检测模式下,对痰喘半夏颗粒指纹图谱中的色谱峰进行了定性分析。利用所得LCMS一级、二级数据进行分析,推测了 17个色谱峰的化合物身份,分别为甘草黄酮醇、芍药苷内酯苷、芍药苷、沉香四醇、甘草苷、没食子酰基芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、柚皮苷去氢产物、异甘草苷、甘草酸、五味子醇甲、6,7-二甲氧基-2-(苯乙基)色酮、欧前胡素、亚油酸、去氢松香酸。