发酵黄芪的乳酸菌选育与发酵参数优化研究

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微生态制剂—益生菌、益生元,以及益生菌和益生元组合物“合生元”—在畜牧业生产中将会有越来越重要的应用,其中益生菌和益生元的重要来源分别是乳酸菌和植物多糖。但传统合生元常常是乳酸菌和植物多糖的简单组合,并没有充分发挥微生物发酵的巨大潜力,研究表明微生物发酵中药具有提高中药活性成分含量、提高药效和降低毒副作用等突出优点。所以研究乳酸菌发酵中药对于开发新型合生元饲料添加剂具有重要意义。本文通过对鸡肠道混合菌驯化,获得一株发酵黄芪性能优良的乳杆菌,并对该菌的发酵参数进行了优化,旨在为开发新型合生元饲料添加剂做铺垫。主要结论如下:1、进行了优良菌株的选育,获得一株能使发酵液中粗多糖含量大幅度提高的优良乳杆菌,并初步鉴定该菌属于乳杆菌属:首先通过添加黄芪提取物的培养基反复驯化鸡肠道混合菌,再通过选择培养基筛选到8株菌,然后通过研究这些菌株对发酵液粗多糖得率的影响和黄芪提取物对这些菌株的增殖作用,筛选到一株发酵黄芪的优良菌株FGM1,该菌株能使发酵液粗多糖得率比黄芪提取物中提高131%,即从5.64%提高到13.03%,并且黄芪对该菌株增殖作用明显,菌体浓度比空白对照提高110%(其中多糖含量和菌体浓度分别用蒽酮-硫酸法和比浊法测定),最后用形态学和微量生化鉴定对优良菌株FGM1初步鉴定属于乳杆菌属。2、对优良菌株FGM1进行了发酵参数(发酵培养基和发酵条件)优化研究,结果表明均匀设计和人工智能方法是快速高效的发酵参数优化方法:先以发酵液中粗多糖得率为优化目标,用均匀设计法对发酵培养基各组分配比进行初步实验设计,用人工神经网络法建立了黄芪发酵液中粗多糖得率与培养基配方之间的预测模型,用具有全局优化功能的遗传算法求出最佳发酵培养基:玉米粉42.10 g/L、氮源7.45 g/L、胡萝卜粉9.80 g/L、KH2PO4-K2HPO4 2.18g/L、肉膏6.25 g/L,以此条件进行验证实验,发酵液中粗多糖的得率可达25.6%,比优化前提高了6.85%,且与粗多糖得率优化预测值24.81%的相对误差小于4%,完全达到发酵领域的要求。在获得最近培养基配方的基础上,再次以发酵液中粗多糖得率为目标,用均匀设计法和MATLAB优化工具箱对发酵培养基初始pH、发酵时间、发酵温度和接种量等发酵条件进行优化,得到最佳发酵条件为:发酵培养基初始pH 6.7、发酵时间68h、发酵温度38℃、接种量5%,以此最佳发酵条件进行验证实验,发酵液中粗多糖的得率可达27.94%,比优化前提高了9.14%,且与粗多糖得率优化预测值29.43%的相对误差小于6%,基本达到发酵领域的要求。
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