【摘 要】
：
L-天冬酰胺酶是治疗儿童急性淋巴细胞白血病等血液癌症的重要药物,也是去除油炸食品中致癌物质丙烯酰胺的关键酶。由于现有的以动物来源为主的L-天冬酰胺酶存在半衰期短、稳定性差、活性低等问题,因此,急需寻找性质优良的L-天冬酰胺酶的新来源。本实验室前期筛选到一株新颖的中华陶厄氏菌Thauera sinica K11T,经序列对比分析发现,该菌株的基因序列中有可编码L-天冬酰胺酶的基因。因此,本论文将对该
论文部分内容阅读
L-天冬酰胺酶是治疗儿童急性淋巴细胞白血病等血液癌症的重要药物,也是去除油炸食品中致癌物质丙烯酰胺的关键酶。由于现有的以动物来源为主的L-天冬酰胺酶存在半衰期短、稳定性差、活性低等问题,因此,急需寻找性质优良的L-天冬酰胺酶的新来源。本实验室前期筛选到一株新颖的中华陶厄氏菌Thauera sinica K11T,经序列对比分析发现,该菌株的基因序列中有可编码L-天冬酰胺酶的基因。因此,本论文将对该微生物来源的L-天冬酰胺酶的重组表达、产酶发酵条件优化、酶学性质分析及定点突变改造等进行研究,为该酶的推广应用奠定基础。首先,利用基因工程技术成功构建了两株L-天冬酰胺酶的异源表达菌株E.coli BL21-p ET28a-ans B1和E.coli BL21-p DE1-ans B2。经过对发酵条件的优化,重组菌E.coli BL21-p ET28a-ans B1的最适产酶条件为:麦芽糖为碳源,天冬酰胺为氮源,IPTG终浓度为1.0 m M,诱导时间为8 h,诱导温度为30℃。重组菌E.coli BL21-p DE1-ans B2的最适产酶条件为::酵母粉为碳源,氯化铵为氮源,IPTG终浓度为0.5 m M,诱导时间为10h,诱导温度为30℃。其次,对重组菌E.coli BL21-p ET28a-ans B1生产的L-天冬酰胺酶的性质进行了表征。结果表明,L-天冬酰胺酶的最适温度和p H分别为55℃和8.0,且该酶在50℃-70℃和p H 6.0-8.0条件下较为稳定;Mg2+、Mn2+、Ba2+、Ni2+对酶活有一定的促进作用,而Ag+、Hg2+和SDS对酶活有强烈的抑制作用,Ca2+、Fe2+、Fe3+、Co2+、Cu2+、Span-80和EDTA对酶活有轻微的抑制作用,Zn2+、Na+、K+、Cr3+、Triton X-100对酶活性几乎无影响;L-天冬酰胺为底物时,该酶的动力学参数Km值为2.683 m M,V max值为83.33μmol·min-1·mg-1。最后,在重组菌E.coli BL21-p ET28a-ans B1的基础上,利用重折叠PCR技术制备了带有突变位点的目的基因,构建了三种突变重组菌,并对突变体G129AASN、P130AASN和S252NASN的酶学性质进行了研究。G129AASN的酶学性质:最适反应条件为55℃、p H8.0;该酶在p H 6.0-10.0、温度小于60℃时稳定性较好;Co2+对该酶的活性具有一定的促进作用;该酶对四种酰胺类底物的活性均有所增加;该酶的Km和Vmax分别为2.097m M和81.3μmol·min-1·mg-1。P130AASN的酶学性质:最适反应条件为55℃、p H 7.0;该酶在p H 6.0-11.0、温度小于70℃时稳定性较好;Co2+对该酶的活性具有一定的促进作用,Mg2+、Ba2+在一定程度上抑制酶的活性;该酶对D-谷氨酰胺的活性降低,对其余酰胺类底物活性均增加;该酶的Km和Vmax分别为2.69 m M和64.52μmol·min-1·mg-1。S252NASN的酶学性质:最适反应条件为55℃、p H 8.0;该酶在温度低于75℃、p H 6.0-10.0时,稳定性较好;Co2+、Cr3+对该酶的活性具有一定的促进作用,Mn2+、Ba2+在一定程度上抑制酶的活性;该酶对天冬酰胺类底物的活性轻微降低,对谷氨酰胺类的活性增加;该酶的Km和Vmax分别为3.899 m M和91.74μmol·min-1·mg-1。
其他文献
渣油加氢技术已经成为实现重油清洁高效转化的关键技术,但渣油中金属含量过高会严重影响加工效率。经过长时间的研究,重金属镍和钒对渣油加工的危害已经基本上被抑制和消除,金属铁和钙的危害逐渐引起人们重视。本论文主要以国内某炼厂渣油加氢装置的加氢系列油样A为研究对象,研究原油经过常减压蒸馏、渣油掺混、上流式固定床加氢反应后,油样性质变化和油中铁、钙化合物分布规律及其形态分布的变化,并以B和C加氢前后油样验证
当前,我国总体大气环境形式严峻,区域复合型大气污染突出,雾霾、臭氧污染天气时有发生,而促进臭氧和二次PM2.5形成的主要前体物之一就是挥发性有机物（VOCs）,因此治理我国大气环境的关键是有效管控VOCs排放量。石化行业作为VOCs的主要排放源之一,其无组织排放更是受到越来越多的关注,无组织排放的源强核算是研究热点。石化行业无组织VOCs主要来自于装卸过程挥发损失、储罐呼吸挥发损失和设备动静密封点
荧光金纳米簇（Fluorescent Gold Nanoclusters,AuNCs）,是一种重要的纳米材料,也是一种常见的荧光探针。相比于其他纳米荧光材料,荧光金纳米簇具备小尺寸、低毒性、良好的水溶性、良好的生物相容性和良好的荧光稳定性等优势,因此在生物成像、抗氧化、药物转运、癌症治疗等领域拥有越来越广泛的应用,引起了许多学者的关注。本论文主要开发了以天然羽绒角蛋白水解物为配体制备荧光金纳米簇的
振动光谱是工业生产和基础研究中最常用的表征工具之一。振动光谱的获取过程繁琐,分析依赖人工。这两点大大影响了振动光谱在工业上的应用。如何提升振动光谱获取效率,降低时间和人力成本,是领域内亟待解决的问题。本论文主要依靠人工神经网络这一计算机科学领域的前沿先进技术,构建振动光谱预测模型与结构识别模型,以期解决工业上光谱应用的相关问题。具体研究内容如下:第一,本论文利用构建好的分子数据集量子机器（Quan
核苷酸在生物体中有着代谢调节、遗传信息存储和能量提供等作用,核苷作为核苷酸的重要组成部分,存在着巨大的研究价值和商业价值。天然的核苷由碱基和戊糖环单元组成,其脱氧戊糖环构型为D-构型。L-型核苷中的脱氧糖环构型为L-型,在手性中心上与天然核苷构型相反,是天然D-型核苷的手性对映体。由于L-型核苷在人体内不会被酶的识别和被酶解,表现出了巨大的药用潜力,如今市面上已经有了众多的L-型核苷药物。本文以1
目前,随着煤化工行业快速发展,其生产过程产生的相关废弃物也逐年增加,其中废催化剂的产生量较大,同时面临的废催化剂处置问题也比较艰巨,甲醇制烯烃废催化剂通常被判定为危险废物进行处理,但《国家危险废物名录》中未将其列入,其危险属性有待鉴别。本课题采用国标方法对未明确属性的甲醇制烯烃废催化剂进行鉴别,通过对某煤化工企业甲醇制烯烃装置的工艺流程、废催化剂产生原因以及利用处置情况进行调研,并对产生废催化剂的
威兰胶是鞘氨醇单胞菌在代谢过程中产生的一种微生物多糖,因其理化性质独特,近年来被广泛应用于石油、食品、医药和建筑等行业。本文以预测的威兰胶合成途径为依据,选取催化级联反应的酶UgpG（UDP-葡萄糖焦磷酸化酶）和WelB（葡萄糖磷酸异戊二烯转移酶）为研究对象,借助TALE-DNA人工支架,使二者形成多酶复合体,模拟底物沟道传递效应,尝试构建高产威兰胶菌株,为后续通过代谢工程方法理性改造菌株,调控威
L-天冬酰胺酶是治疗儿童急性淋巴细胞白血病的重要药物,也是去除油炸食品中致癌物质丙烯酰胺的关键用酶。由于现有商品L-天冬酰胺酶存在半衰期短、稳定性差等问题,因此,寻找性质优良的L-天冬酰胺酶的新来源是现阶段的主要任务。本论文将在实验室前期构建的两种新颖微生物（Pannonibacter carbonis Q2.11和Aneurinibacillus sp.XH2）来源的L-天冬酰胺酶重组表达菌株的
挥发性有机物是导致光化学烟雾、二次有机气溶胶和大气有机酸浓度升高的化学物质,尤其近几年随着城市经济的发展,VOCs的排放量逐年增加,大气污染主要集中在京津冀、山东半岛、长江三角等发达地区,其排放不仅会造成环境空气质量的下降,而且长期暴露在VOCs环境中会对人体健康造成危害。石化企业VOCs在生产运输过程中通过挥发、泄漏等途径进入大气中,对周边环境造成污染,是国家管控VOCs,关注的重点行业之一。本
目的：探讨中医系统化护理对失眠症患者临床症状、情绪困扰及睡眠质量的影响。方法：选取2020年5月1日～2022年3月1日收治的80例失眠症患者为研究对象，按照随机数字表法分为对照组和观察组各40例，均给予相同的治疗，对照组实施常规护理，观察组实施中医系统化护理；比较两组治疗有效率、临床症状评分、情绪困扰[采用焦虑自评量表（SAS）、抑郁自评量表（SDS）]、睡眠质量[采用匹兹堡睡眠质量指数（PSQ